[发明专利]一种硫酸软骨素化ES2肽联合紫杉醇的结合物及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种硫酸软骨素化ES2肽结合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过控制CYS、ES2肽和PTX的供给量，反应体系的pH，反应时间等条件，制备得到具有不同结合度的硫酸软骨素～胱胺‑ES2肽结合物和/或紫杉醇‑硫酸软骨素～胱胺‑ES2肽结合物。本发明的硫酸软骨素化ES2肽联合胱胺和紫杉醇的结合物与ES2肽相比，保留了ES2肽的抗血管生成和抗肿瘤活性，并整合了PTX的抗肿瘤作用，使得合成的结合物具有更高的稳定性、靶向性和生物活性，从而具有更好的使用效果和应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种硫酸软骨素化ES2肽联合紫杉醇的结合物及其制备方法与应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

内皮抑素(Endostatin，ES)是目前最有效的内源性血管生成抑制剂之一，它是XVIII型胶束的C端蛋白水解片段，能够有效抑制肿瘤周围的血管新生，从而抑制肿瘤的形成和转移，已被SFDA批准用于临床治疗。目前认为ES能够通过多种途径来影响血管生成的多个过程来达到抑制肿瘤血管形成的目的，以阻断肿瘤的营养供给。ES2(IVRRADRAAVP，SEQID NO.1)是ES中的一段由11个氨基酸组成的多肽序列，包含ES中的氨基酸60-70序列和三个表面暴露的精氨酸残基Arg⁶²，Arg⁶³和Arg⁶⁶。ES2肽具有抑制内皮细胞增殖和迁移的生物活性，其对血管生成的抑制能力要明显优于ES，因此，ES2在肿瘤、类风湿性关节炎、糖尿病眼部疾病等与新血管生成有密切联系的疾病的治疗中具有重要作用。但ES2肽也具有一些多肽类药物普遍具有的缺点，如半衰期短、稳定性差等，这严重阻碍了其在临床中的应用。

综上，现有的多肽类新生血管抑制剂多存在体内半衰期短、稳定性差、靶向性低等问题，限制了多肽类药物在制备血管生成抑制剂中的应用。因此，本领域迫切需要开发一种新型的多肽类血管生成抑制剂。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种硫酸软骨素化ES2肽联合紫杉醇的结合物及其制备方法与应用。本发明成功制备得到具有不同结合度的硫酸软骨素～胱胺-ES2肽结合物和/或紫杉醇-硫酸软骨素～胱胺-ES2肽结合物，其同时具有良好的稳定性和生物活性。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种硫酸软骨素化ES2肽结合物，，其由胱胺中的氨基通过酰胺化反应与硫酸软骨素中的羧基相连后，ES2肽的羧基再次通过酰胺化反应与胱胺中游离的氨基结合而成，其结构式如下：

CS-CYS-(ES2)n；

式中，n＝30～60；ES2的分子量为1223Da，CS的分子量为30kDa。

本发明中的硫酸软骨素化ES2肽联合胱胺结合物与ES2肽相比，增强了ES2肽的抗血管生成和抗肿瘤活性，整合了大分子硫酸软骨素在肿瘤组织中的靶向性，使得获得的结合物生物活性更强，靶向性更高，稳定性更强，因而表现出了较好的应用潜力。

进一步的，所述硫酸软骨素化ES2肽结合物还修饰有紫杉醇，具体的，其由胱胺上的氨基通过酰胺键与硫酸软骨素上的羧基连接，紫杉醇的羟基通过酯键与硫酸软骨素上的羧基相连以及ES2肽的羧基通过酰胺键与胱胺上的游离氨基连接形成，结构式如下：

(PTX)n₁-CS-CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁＝1～13，n₂＝30～50，ES2的分子量为1223Da，等电点为10.42，硫酸软骨素的分子量为30kDa。