[发明专利]一种硫酸软骨素化ES2肽联合紫杉醇的结合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种硫酸软骨素化ES2肽结合物，其特征在于，其由胱胺中的氨基通过酰胺化反应与硫酸软骨素中的羧基相连后，ES2肽的羧基再次通过酰胺化反应与胱胺中游离的氨基结合而成，其结构式如下：

CS-CYS-(ES2)n；

式中，n=30~60；

所述硫酸软骨素化ES2肽结合物还修饰有紫杉醇，具体的，其由胱胺上的氨基通过酰胺键与硫酸软骨素上的羧基连接，紫杉醇的羟基通过酯键与硫酸软骨素上的羧基相连以及ES2肽的羧基通过酰胺键与胱胺上的游离氨基连接形成，结构式如下：

(PTX)n₁-CS-CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁=1~13，n₂=30~50；

所述ES2多肽序列为：IVRRADRAAVP，SEQ ID NO.1。

2.权利要求1所述的硫酸软骨素化ES2肽结合物的制备方法，其特征在于，包括：

S1、制备CS~CYS结合物：将CS溶于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂活化CS中的羧基，活化完成后加碱液调节pH至弱碱性，然后缓慢加入CYS溶液进行反应，反应完成后，反应产物经纯化即得CS~CYS结合物；

S2、制备CS~CYS-ES2结合物：将ES2溶于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂，活化羧基后，缓慢加入CS~CYS溶液继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得CS~CYS-ES2结合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，调节pH至弱碱性具体为加入碱液调节pH至7.40；加入CYS溶液后反应时间控制为8~15 h；反应产物纯化包括透析和干燥步骤；

所述步骤S2中，活化时间控制为10-60 min；缓慢加入CS~CYS溶液继续反应，反应时间控制为12~48 h；反应产物纯化步骤包括透析、干燥。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，入CYS溶液后反应时间控制为10 h。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，活化时间控制为45 min。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，缓慢加入CS~CYS溶液继续反应，反应时间控制为24h。

7.权利要求1所述的硫酸软骨素化ES2肽结合物的制备方法，其特征在于，包括：

S1、制备CS~CYS结合物：将CS溶于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂活化CS中的羧基，活化完成后调节pH至弱碱性，然后缓慢加入CYS溶液进行反应，反应完成后，反应产物经纯化即得CS~CYS结合物；

S2、制备CS~CYS-TBA结合物：将CS~CYS溶于水中，加入Dowex离子交换树脂，搅拌后过滤除去树脂，使用TBA溶液调整CS~CYS溶液pH至弱碱性，冻干即得到CS~CYS-TBA结合物；

S3、制备PTX-CS~CYS结合物：将CS~CYS-TBA溶于有机溶剂中，添加DCC和DMAP进行催化反应，然后缓慢加入PTX溶液，继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得PTX-CS~CYS结合物；

S4、制备PTX-CS~CYS-ES2结合物：将ES2溶于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂，缓慢加入PTX-CS~CYS溶液继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得PTX-CS~CYS-ES2结合物。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，调节pH至弱碱性具体为加入碱液调节pH至7.40；加入CYS溶液后反应时间控制为8~15 h；反应产物纯化包括透析和干燥步骤；

所述步骤S2中，加入等量Dowex离子交换树脂后进行搅拌，搅拌时间控制为8~10 h；所述TBA溶液浓度控制为15-25%；使用TBA溶液调整CS~CYS溶液pH至弱碱性具体为使用20%的TBA溶液调整CS~CYS溶液pH至7.07。