[发明专利]一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和该化合物在制备抗肿瘤药物中应用。该化合物为螺甾烷醇型甾体皂苷，分子式为C₄₅H₇₄O₁₇，分子量为886。该化合物由药用植物知母经75%乙醇提取，水饱和的正丁醇萃取，采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、凝胶柱色谱等多种方法分离纯化而得。MTT实验结果表明，该化合物对人乳腺癌细胞株(MCF‑7)、人肝癌细胞株(HepG2)有显著的抗肿瘤活性，有望成为抗肿瘤候选药物。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中应用。

背景技术

癌症作为人类死亡的主要因素，目前已经成为全球性的公共健康问题。因为癌症具有死亡率高、治疗效率低、难以控制等特点，所以许多科学家致力于开发新的治疗方法和新型化疗策略用于治疗各种癌症。但由于有些治疗方案具有明显的副作用以及高昂的治疗费用，所以近年来各国将目光投向天然药物。

天然药物以其作用靶点广、低毒的优势，逐渐成为癌症治疗药物研究的焦点，且在癌症治疗方面取得了较大进展。目前，临床上应用的许多药物都直接或间接来源于天然产物，天然产物不仅可以作为药物半合成的先导化合物，而且可以作为药物合成的模板，为新药设计提供新颖的思路。天然药物的生物活性成分逐渐显示出了独特的优势和广阔的应用前景。

知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)，又名毛知母，为百合科知母属植物知母的干燥根茎，主要分布在我国河北省和安徽省，具有清热泻火、滋阴润燥的功效，可用于热病烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。研究发现，知母中主要含有甾体皂苷类、多糖类、黄酮类、木质素等成分，其中甾体皂苷及其苷元是其主要生物活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗真菌等多种药理活性，在根茎中含量约为总成分的6％。本发明所涉及的甾体皂苷化合物及其活性，迄今为止尚未发现有专利或文献报道。

发明内容

本发明的目的是一种从知母根茎中提取分离得到的新甾体皂苷及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用。

一种知母甾体皂苷化合物，其结构式如式I所示：

上述甾体皂苷化合物，其母核为萨尔萨皂苷元，属于螺甾烷醇型甾体；甾体3位所连糖基依次为半乳糖基、葡萄糖基、鼠李糖基，糖基连接方式均为1→2位连接。

上述甾体皂苷化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，取知母干燥根茎，用乙醇加热回流提取，浓缩得浸膏状乙醇提取物；

步骤2，将乙醇提取物混悬于纯净水中得混悬液，用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇依次分别萃取，将萃取液浓缩得到三个部位的浸膏；

步骤3，将正丁醇部位浸膏经大孔吸附树脂粗分，用体积比为10:90-95:5的乙醇-水进行第一次梯度洗脱，洗脱物经硅胶柱色谱粗分，再用体积比为20:1-1:1的二氯甲烷-甲醇进行第二次梯度洗脱，洗脱物经第一次ODS反相柱色谱分离，用体积比为30:70-100:0的甲醇-水进行第三次梯度洗脱，然后洗脱物经第二次ODS反相柱色谱分离，用体积比为30:70-100:0的甲醇-水进行第四次梯度洗脱，洗脱物经凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱后纯化得到甾体皂苷化合物。

进一步地，步骤1中所述乙醇为体积浓度为75％的乙醇水溶液，每1kg知母干燥根茎用5L乙醇水溶液(75％)；回流提取次数为3次，每次提取时间为3h。

进一步地，步骤2中是采用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇依次萃取，其中每次萃取时有机溶剂体积与混悬液体积相同。