[发明专利]一种基于UPLC-QTOF-MS检测伸筋草生物碱成分的方法

说明书

本发明提供了一种基于UPLC‑QTOF‑MS检测伸筋草中生物碱成分的方法，包括以下步骤：(1)将伸筋草制成粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量；(2)将步骤(1)所得的伸筋草超声破碎，然后将超声过的伸筋草溶液摇匀，离心，过滤，取续滤液，即得到待测样品；(3)用超高效液相色谱分离步骤(2)中的待测样品，得到生物碱待测样品，将所得的生物碱待测样品用质谱检测，得生物碱成分物质峰，用分析软件对所述物质峰进行定性分析。本发明的方法首次采用UPLC‑QTOF‑MS技术对伸筋草中生物碱成分进行检测并定性，所述方法具有高效、快速、准确的特点。采用本发明的方法共鉴定出34种生物碱成分，为进一步研究伸筋草药效物质基础及全面质量控制提供了依据。

技术领域

本发明涉及一种基于UPLC-QTOF-MS检测化学成分的方法，具体涉及一种基于UPLC-QTOF-MS检测伸筋草中生物碱成分的方法。

背景技术

伸筋草Lycopodii Herba为石松科植物石松Lycopodium japonicum Thunb.的干燥全草，其味微苦、温、辛，归于肝、肾、脾经，具有祛风除湿、舒筋活络、止咳、解毒、消肿等功效。主要含有生物碱和三萜类成分，伴有少量的黄酮及其他类型的化合物，临床上多用于治疗关节屈伸不利、风寒温痹、关节肿痛、筋脉拘急、跌打损伤。现代药理研究表明伸筋草具有抗炎、镇痛、免疫调节、清除自由基、治疗矽肺等作用。其中生物碱类化合物还对心血管系统、神经肌肉、胆碱酯酶抑制等有一定作用(滕翠翠,何永志,冯金磊,等.伸筋草的化学成分研究[J].中草药,2010,41(12):1960-1963.)。

作为一种重要并且普遍应用的中药，有长期的临床应用实践，得进一步的研究与开发。前期学者对伸筋草进行了大量的研究，但其化学成分研究多关注于其三萜类成分。中国药典2015年版一部伸筋草药材项下，仅采用对照药材进行TLC鉴别，没有含量检测项。且由于同科同属植物与其形状相似，难以辨别，并且化学组分复杂，无法全面的评价伸筋草药材的内在质量。现有文献史利利(史利利,何永志.伸筋草石松三萜化学成分[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(9):90-92.)利用正相色谱技术结合薄层色谱法对伸筋草正丁醇层提取物进行分离纯化，得到的仅是伸筋草中三萜类化学成分，主要的生物碱类成分尚未研究；尤献民(尤献民,闫玉军,邹桂欣,等.伸筋草药材质量标准研究[J].辽宁中医药大学学报,2012(12):15-17.)等人对伸筋草药材黄酮类、三萜类及生物碱类特征成分进行TLC鉴别研究，但其仅对α-玉柏碱进行了含量测定，对其他生物碱类成分并未进行详细分析。生物碱作为伸筋草主要化学成分之一，目前研究的尚不全面，其中的药效物质基础的研究还不够深入。因此，对伸筋草的药效物质基础和质量控制开展进一步的研究显得尤为重要。

近年来，UPLC-QTOF-MS在天然产物化学成分的研究中已得到广泛应用，并且被逐渐应用于中药药效基础、药物质量控制，已经成为药理学研究中高效、可靠的分析方法(许玲玲,安睿,王新宏.液质联用技术在中药分析中的应用[J].中成药,2006,28(2):239-246.)。例如胥爱丽等(胥爱丽,董玉娟,陈昭,等.UPLC/Q-TOF MS法对何首乌配方颗粒化学成分的快速分析[J].中药材,2015,38(6).)采用了超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用技术，鉴定出何首乌配方颗粒中的5个化合物，为何首乌配方颗粒的质量控制提供参考；现有技术中，还没有针对UPLC-QTOF-MS技术对伸筋草中生物碱类成分的检测方法的报道。

发明内容

发明要解决的问题

基于现有技术中的上述问题，本发明的目的在于提供一种基于UPLC-QTOF-MS技术对伸筋草中生物碱成分的检测方法，使所述方法具有快速、准确、批量检测的特点。且将新的化学成分的研究和药效学实验相结合，进行中药谱效学研究，实现伸筋草药材质量与药效的统一，为伸筋草药材的全面质量控制提供依据。

用于解决问题的方案