[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9编辑大白猪CD163基因的方法在审
| 申请号： | 201810361147.1 | 申请日： | 2018-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN108753832A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 何祖勇;郭春和;刘小凤;丛佩清;王敏;刘小红;陈瑶生 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/113;C12N15/85 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 刘婉 |
| 地址： | 510275 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因 外显子 核苷酸序列 生物学功能 高致病性 细胞表面 胞外域 毒株 敲除 抵抗 | ||
1.一种利用CRISPR/Cas9编辑大白猪CD163基因的方法，其特征在于：利用CRISPR/Cas9编辑大白猪CD163基因，破坏CD163受体胞外域SRCR5，敲除所述CD163基因第7个外显子DNA片段，所述CD163基因的第7个外显子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用于敲除所述CD163基因的所述第7个外显子的gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，通过CRISPR/Cas9进行基因编辑的步骤如下：
将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gRNA-10构建到能表达Cas9蛋白的pX458载体上，得到pX458-gRNA-10；将核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的gRNA-134构建到能表达Cas9蛋白的pX458R载体上，得到pX458R-gRNA-134，其包括两种能够特异性识别CD163基因并对识别位点进行打靶的CRISPR/Cas9系统；将所述pX458-gRNA-10和所述pX458R-gRNA-134共转染猪的离体胎儿肾细胞，分别打靶CD163基因上相应gRNA所识别的位点，从而删除所述CD163基因上两条gRNA所识别位点的中间序列，实现所述CD163基因第7个外显子的DNA片段的精确删除。
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