[发明专利]一种从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂的技术领域，尤其涉及一种从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法。

背景技术

海洋球石藻(Coccolithophores)是一类单细胞海洋微型浮游植物，隶属于定鞭藻门(Haptophyta＝Prymnesiophyta)定鞭藻纲(Prymnesiophyceae)。海洋球石藻代谢产物中富含多种生物活性物质，如二十二碳六烯酸(DHA)、聚酮类化合物等，尤其是海洋微藻细胞中总脂含量最高可达细胞干重的50％，这些化合物具有良好的抑菌、抗氧化、抗肿瘤等生物功能，在生物技术领域具有广阔的应用前景。但目前有关海洋球石藻脂类活性物质领域的研究较少。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，旨在通过薄层层析法、硅胶柱层析法、凝胶柱层析法、制备型薄层PTLC等方法对海洋球石藻乙酸乙酯相提取物的邻苯二甲酸二丁酯进行分离、纯化，以便于后续大规模化生产邻苯二甲酸二丁酯。

为了解决上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法,依次以：用乙酸乙酯进行萃取；用反相硅胶柱进行层析；用葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析；用反相硅胶柱进行层析；用正相硅胶柱进行层析；用PTLC制备的方法从海洋球石藻中提取邻苯二甲酸二丁酯。

作为实施例的优选方式，上述提取邻苯二甲酸二丁酯的方法具体包括以下步骤：

步骤一、制备海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯为萃取剂进行萃取处理，合并萃取液，减压浓缩得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

作为实施例的优选方式，海洋球石藻生长至稳定期，收获，冷冻干燥获得海洋球石藻藻粉g，用质量分数为75％的乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，加入等体积的乙酸乙酯和水，反复萃取，收集乙酸乙酯相，合并、减压浓缩至干，获得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

步骤二、反相硅胶柱层析制备邻苯二甲酸二丁酯一次粗品：将获得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到邻苯二甲酸二丁酯一次粗品；

作为实施例的优选方式，将海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用适量的分析纯甲醇溶解，加入量以甲醇正好没过萃取物为宜，进行反相硅胶柱层析；依次用水，质量分数为25％的甲醇溶液，质量分数为50％的甲醇溶液，质量分数为75％的甲醇溶液，甲醇洗脱，每个梯度洗脱1.5L，流速控制为30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并邻苯二甲酸二丁酯高浓度流分段，减压浓缩至干，获得邻苯二甲酸二丁酯一次粗品；

步骤三、葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20层析制备邻苯二甲酸二丁酯二次粗品：将邻苯二甲酸二丁酯一次粗品以葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到邻苯二甲酸二丁酯二次粗品；

将邻苯二甲酸二丁酯一次粗品用适量甲醇溶解后，上葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，流速控制12-13S/drop，使用自动收集器收集各馏分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并80至90管的馏分，减压浓缩至干，获得邻苯二甲酸二丁酯二次粗品；

步骤四、反相硅胶柱层析制备邻苯二甲酸二丁酯一次精品：将获得的邻苯二甲酸二丁酯二次粗品以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到邻苯二甲酸二丁酯一次精品；

将邻苯二甲酸二丁酯二次粗品，依次采用质量分数为30％，40％，50％，60％，70％的甲醇水溶液梯度洗脱，最后用甲醇洗脱进行反相硅胶柱层析，每个梯度洗脱300mL，流速控制为5mL/min，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并邻苯二甲酸二丁酯高浓度流分段，减压浓缩至干，获得邻苯二甲酸二丁酯一次精品；

步骤五、正相硅胶柱层析制备邻苯二甲酸二丁酯二次精品：将获得的邻苯二甲酸二丁酯一次精品以正相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到邻苯二甲酸二丁酯二次精品；

将邻苯二甲酸二丁酯一次精品经过正相硅胶柱层析：用硅胶粉拌样，硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后用石油醚丙酮体系进行洗脱，石油醚和丙酮的体积比为200：1，收集馏分，减压浓缩至干，获得邻苯二甲酸二丁酯二次精品；