[发明专利]唐棣的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培育技术领域，是一种唐棣的组织培养方法。

背景技术

桤叶唐棣(Amelanchier alnifolia)是蔷薇科唐棣属一种落叶小乔木或灌木。桤叶唐棣树形为圆形丛状，树皮褐黑色，小枝粗壮细长，紫褐色。果实中含糖11％至21％，含蛋白质1.9％至9.7％。每100g鲜果中，含镁400mg、含钾300mg、含原花青素168mg、含钙102mg、含铁79mg、含锌3.28mg，并且还含钠、锰、胡萝卜素等微量元素，富含18种氨基酸。桤叶唐棣的叶、茎和果实中含茶多酚。果实中含有矢车菊花色素苷、槲皮素源性黄酮醇苷和绿原酸的衍生物。叶子中含有槲皮素和山柰酚衍生的黄酮苷、儿茶素、新木脂素和羟基肉桂酸。茎中主要含黄酮类、儿茶素和苯甲酸衍生物。桤叶唐棣的茎和叶子中含有原花青素、3％的干浆果生物量和10％至14％干物质质量，此外，桤叶唐棣种子中含有苦杏仁苷、种子油。

唐棣树种由国家林业局“948”项目自加拿大引进，桤叶唐棣是重要的兼顾生态效益的经济林树种，具有耐寒耐旱和抗逆性强的特点以及较高的种植效益，是目前国际上发展速度最快的第三代新型水果之一，具有广阔的市场前景，正在日益受到政府、社会和商业资本的关注和亲睐。

但现有唐棣的培育方法存在培育时间长、生根率低、根数少且短，严重影响了唐棣种苗的繁殖系数和种苗质量，已不能满足唐棣种苗规模化生产的要求。

发明内容

本发明提供了一种唐棣的组织培养方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有唐棣的培育方法存在培育时间长、生根率低和根数少且短，严重影响了唐棣种苗的繁殖系数和种苗质量，已不能满足唐棣种苗规模化生产要求的问题。

本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种唐棣的组织培养方法，按下述步骤进行：

第一步，唐棣无菌苗的培养，将唐棣种子用水冲洗干净，先用乙醇水溶液浸泡，乙醇水溶液浸泡后用无菌水冲洗，无菌水冲洗后再用HgCl₂水溶液浸泡，HgCl₂水溶液浸泡后用无菌水冲洗，最后将唐棣种子表面的水渍吸干后接种于MS培养基上，在温度为22℃至26℃、光照强度为1500Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养2d至3d后种子发芽，培养10d后得到唐棣无菌苗；

第二步，愈伤组织诱导，选取唐棣无菌苗的茎尖、茎段和叶片分别作为诱导愈伤组织，将茎尖和茎段切成小段，无菌苗的叶片切成小片，然后将切成小段的茎尖和茎段与切成小片的叶片消毒后，得到消毒后的愈伤组织；

第三步，唐棣丛生芽诱导培养，将消毒后的愈伤组织接种到培养基中，在温度为23℃至26℃、光照强度为1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养18d至22d后，分化获得唐棣丛生芽；

第四步，唐棣无菌苗生根培养，将唐棣丛生芽切成单芽后置于装有1/2MS生根培养基的瓶中，在温度为23℃至26℃、光照强度为1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养18d至22d后，得到唐棣带根苗；

第五步，炼苗与移栽，将得到的唐棣带根苗在室温下打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2d至4d，待表面角质形成后将唐棣带根苗取出，用自来水洗净根部，洗净根部后移栽到基质中并浇透水，培养28d至35d后移栽至大田。

下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

上述第一步中，唐棣种子为籽粒饱满、大小一致的种子；或/和，第一步中，用自来水将唐棣种子冲洗干净。

上述第一步中，冲洗干净后的唐棣种子先用体积百分比为70％的乙醇水溶液浸泡3min至6min，用无菌水冲洗2次至3次，再用质量百分比为0.1％的HgCl₂水溶液浸泡8min至10min，浸泡后用无菌水冲洗4次至5次，最后用已灭菌的滤纸吸掉唐棣种子表面的水渍后接种于MS培养基上。

上述第二步中，茎尖和茎段切成长为0.5cm至0.7cm的小段，无菌苗的叶片切成0.3cm×0.3cm的小片，然后将切成小段的茎尖和茎段与切成小片的叶片用体积百分比为70％的乙醇水溶液浸泡13s至17s进行消毒。