[发明专利]唐棣的组织培养方法

权利要求书

1.一种唐棣的组织培养方法，其特征在于按下述步骤进行：

第一步，唐棣无菌苗的培养，将唐棣种子用水冲洗干净，先用乙醇水溶液浸泡，乙醇水溶液浸泡后用无菌水冲洗，无菌水冲洗后再用HgCl2水溶液浸泡，HgCl2水溶液浸泡后用无菌水冲洗，最后将唐棣种子表面的水渍吸干后接种于MS培养基上，在温度为22℃至26℃、光照强度为1500Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养2d至3d后种子发芽，培养10d后得到唐棣无菌苗；

第二步，愈伤组织诱导，选取唐棣无菌苗的茎尖、茎段和叶片分别作为诱导愈伤组织，将茎尖和茎段切成小段，无菌苗的叶片切成小片，然后将切成小段的茎尖和茎段与切成小片的叶片消毒后，得到消毒后的愈伤组织；

第三步，唐棣丛生芽诱导培养，将消毒后的愈伤组织接种到培养基中，在温度为23℃至26℃、光照强度为1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养18d至22d后，分化获得唐棣丛生芽；

第四步，唐棣无菌苗生根培养，将唐棣丛生芽切成单芽后置于装有1/2MS生根培养基的瓶中，在温度为23℃至26℃、光照强度为1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h进行培养，培养18d至22d后，得到唐棣带根苗；

第五步，炼苗与移栽，将得到的唐棣带根苗在室温下打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2d至4d，待表面角质形成后将唐棣带根苗取出，用自来水洗净根部，洗净根部后移栽到基质中并浇透水，培养28d至35d后移栽至大田。

2.根据权利要求1所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第一步中，唐棣种子为籽粒饱满、大小一致的种子；或/和，第一步中，用自来水将唐棣种子冲洗干净。

3.根据权利要求1或2所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第一步中，冲洗干净后的唐棣种子先用体积百分比为70％的乙醇水溶液浸泡3min至6min，用无菌水冲洗2次至3次，再用质量百分比为0.1％的HgCl2水溶液浸泡8min至10min，浸泡后用无菌水冲洗4次至5次，最后用已灭菌的滤纸吸掉唐棣种子表面的水渍后接种于MS培养基上。

4.根据权利要求1或2所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第二步中，茎尖和茎段切成长为0.5cm至0.7cm的小段，无菌苗的叶片切成0.3cm×0.3cm的小片，然后将切成小段的茎尖和茎段与切成小片的叶片用体积百分比为70％的乙醇水溶液浸泡13s至17s进行消毒。

5.根据权利要求3所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第二步中，茎尖和茎段切成长为0.5cm至0.7cm的小段，无菌苗的叶片切成0.3cm×0.3cm的小片，然后将切成小段的茎尖和茎段与切成小片的叶片用体积百分比为70％的乙醇水溶液浸泡13s至17s进行消毒。

6.根据权利要求3或4所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入1.0mg至1.5mg的6-苄氨基嘌呤混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.1mg至0.5mg的萘乙酸混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.1mg至0.5mg的2,4-二氯苯氧乙酸混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.3mg的萘乙酸和1.0mg 4-(吲哚-3-基)丁酸混合后得到。

7.根据权利要求1或2或5所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入1.0mg至1.5mg的6-苄氨基嘌呤混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.1mg至0.5mg的萘乙酸混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.1mg至0.5mg的2,4-二氯苯氧乙酸混合后得到；或，第三步中，培养基为按1L MS培养基中加入0.3mg的萘乙酸和1.0mg 4-(吲哚-3-基)丁酸混合后得到。

8.根据权利要求1或2或5所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第五步中，室温温度为23℃至26℃，基质为泥炭土和珍珠岩按质量比为1:1的混合物；或/和，第五步中，在温度为20℃至28℃下培养28d至35d后移栽至大田，移栽时大田的温度为20℃至28℃、相对湿度为75％至80％、遮阳率为70％至80％，移栽至大田后的一个星期内，每天喷水3次至5次。

9.根据权利要求3或4或6所述的唐棣的组织培养方法，其特征在于第五步中，室温温度为23℃至26℃，基质为泥炭土和珍珠岩按质量比为1:1的混合物；或/和，第五步中，在温度为20℃至28℃下培养28d至35d后移栽至大田，移栽时大田的温度为20℃至28℃、相对湿度为75％至80％、遮阳率为70％至80％，移栽至大田后的一个星期内，每天喷水3次至5次。