[发明专利]一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法

说明书

本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法；所述的烟草花叶病毒属病毒通用检测引物对序列为：正向引物TobamodF：5’‑TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG‑3’，反向引物TobamodR：5’‑ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT‑3’；本发明中的检测引物是基于烟草花叶病毒属中的32种病毒基因组保守区序列进行设计，用该属中的7种病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好；从而建立了一种能够检测至少7种烟草花叶病毒属病毒的通用检测引物及方法，且具有检测效率高、灵敏度高、成本低的特点。

技术领域

本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法。

背景技术

烟草花叶病毒属(Tobamovirus)是帚状病毒科(Virgaviridae)中病毒种类最多的一个属，根据2012年发布的国际病毒分类委员会(ICTV)第九次大会报告，Tobamovirus有25个确定种和6个暂定种，其代表种为TMV。而根据ICTV最新的在线报告显示，Tobamovirus已有35种病毒(http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy.asp)。烟草花叶病毒属病毒在世界各地均有分布，能侵染茄科、十字花科、葫芦科等重要作物并引起严重危害，是最具经济重要性的病毒属之一。

目前为止，植物病毒中已有Potyvirus、Begomovirus、Luteovirus等病毒属的通用检测引物，大大提高了这些病毒的检测效率。烟草花叶病毒属病毒种类多且侵染性强，尤其是在茄科作物上发病严重，但迄今没有该属病毒的通用检测引物，用单一的特异性检测引物检测疑似病毒的侵染，工作量大、成本高且繁琐。为此，建立烟草花叶病毒属病毒(tobamoviruses)快速、简便、灵敏的检测技术很有必要，将对调查分析tobamoviruses的发生、分布，为烟草花叶病毒属病毒种类的鉴定以及病害防控等提供技术支撑。

发明内容

为了克服背景技术中存在的不足，本发明提出一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法，本发明检测方法简单，检测结果快速，灵敏度高。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物序列为：

正向引物TobamodF：5’-TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG-3’，

反向引物TobamodR：5’-ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT-3’；

进一步，所述引物对TMGMV扩增出871bp的产物，对PMMoV扩增出877bp的产物，对TMV、ToMV、ToMMV扩增出880bp的产物，对ORSV扩增出889bp的产物，对CGMMV扩增出874bp的产物。

进一步，所述引物中N可以是A、C、G、T四种碱基中的任意一种，K为G和T中的一种，Y为C和T中的一种，B为C、G、T中的一种，V为A、C、G中的一种。