[发明专利]一种合欢叶片中的内生菌H6菌株分离方法及其应用有效
| 申请号： | 201310365784.3 | 申请日： | 2013-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN103555607B | 公开（公告）日： | 2018-08-31 |
| 发明（设计）人： | 曲田丽;金玉兰;肖琳;李秀岚 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;A01P3/00;G01N30/06;C12R1/07 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266109 山东省青岛市城*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合欢 叶片 中的 内生菌 h6 菌株 分离 方法 及其 应用 | ||
1.一种合欢内生菌H6的抑菌用途，其特征在于：内生菌H6菌体本身、发酵液、无菌代谢产物及代谢物中活性组分均具有抑菌作用；其中，合欢内生菌H6由中国微生物菌种保藏中心保藏，分类学命名为Bacillus amyloliquefaciens，保藏号：CGMGG No. 7990；所述的菌为苹果腐烂病菌，葡萄黑痘病菌，西瓜枯萎病菌，小麦赤霉病菌，辣椒炭疽病菌。
2.一种合欢内生菌H6抑菌活性组分的分离和检测方法，其中，合欢内生菌H6由中国微生物菌种保藏中心保藏，分类学命名为Bacillus amyloliquefaciens，保藏号：CGMGG No.7990；
其特征在于：由于合欢内生菌H6抑菌活性组分在GC-MS中无法检测，对各组分进行衍生化，方法如下：甲氧胺盐酸盐以20mg/mL的含量溶解于吡啶溶液，超声帮助溶解，吸取100μL溶剂加入已离心干燥好的样品管中，封口，超声15min，涡旋1min，帮助溶解，稍微离心，30℃培养2h，加入100μL BSTFA至样品管中，封口，超声20min溶解，稍微离心，37℃培养6h，离心15min，转速12000r/min，吸取160μL至GC样品玻璃管中；
GC-MS检测条件：HP-5MS毛细管柱，其规格为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度为65℃，进样体积1μL，流速1mL/min，柱箱程序：初始温度65℃保持2min；以5℃/min升至185℃；以1℃/min升温至200℃；再以15℃升温至280℃，保持5min，氦气为载气，恒压模式，进样口压力58.7kPa，离子源和传输线温度分别为230和280℃，电子能量70eV，全扫描扫描范围m/z20～650，溶剂延迟时间5.5min，检测的样品中，环PHE-PRO化合物具有抗菌活性，其保留时间为19.91min，环PHE-PRO化合物结构为：。
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