[发明专利]一株共生真菌及其在铁皮石斛组培与种植阶段的应用

权利要求书

1.一种共生真菌(Epulorhiza sp.) Es-N235，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M2013274。

2.权利要求1所述的共生真菌Es-N235在铁皮石斛组培与种植阶段的应用。

3.权利要求2所述的共生真菌Es-N235在铁皮石斛组培与种植阶段的应用，其特征在于包括如下步骤：

1）平板培养：将共生真菌Es-N235接种至PDA培养基上培养，培养温度为25~30℃，培养时间为2~3d；

2）斜面培养：将步骤1）PDA培养基培养的共生真菌接种至斜面培养基培养，培养温度为25~30℃，培养时间为2~3d；

3）种子培养：将步骤2）中的共生真菌的斜面培养物接种至种子培养基培养，培养温度为25~35℃，培养时间12~24h；

4）铁皮石斛苗的无菌组培：铁皮石斛苗在无菌组培培养基进行无菌组培，光照培养；

5）铁皮石斛苗与共生真菌共生培养：将步骤3）中的种子培养基培养物在无菌条件下，接入步骤4)的铁皮石斛苗群几何中心处共同培养，接入量为10%~30%(v/v),培养温度25~30℃，光照培养，光照强度3000~8000Lux，光照时间12~16h/d，培养14~21d；

6）大田无土栽培：将步骤5)中的共同培养的铁皮石斛幼苗接种至大田进行无土栽培，培养温度25~30℃，光照强度5000~8000Lux，光照时间12~16h/d，培养至长出植株。

4.根据权利要求3所述的共生真菌在铁皮石斛组培与种植阶段的应用，其特征在于：所述步骤1）中PDA平板培养基包含如下质量百分数的组分：马铃薯煮汁20%~30%，碳源5%~10%，无机盐0.03%~0.1%，琼脂1%~3%，其余为水，其中所述碳源为葡萄糖，蔗糖中的一种或多种混合；所述无机盐为钠盐，钾盐或者镁盐中的一种或几种混合。

5.根据权利要求3所述的共生真菌在铁皮石斛组培与种植阶段的应用，其特征在于所述斜面培养基包含如下质量百分数的组分：马铃薯煮汁15%~25%，碳源5%~10%,无机盐0.03%~0.1%，琼脂粉1%~3%，其余为水，其中所述碳源为葡萄糖，蔗糖中的一种或多种混合；所述无机盐为钠盐，钾盐或者镁盐中的一种或几种混合。

6.根据权利要求3所述的共生真菌在铁皮石斛组培与种植阶段的应用，其特征在于所述种子培养基包含如下质量百分数的组分：马铃薯煮汁25%~35%，碳源10%~15%,无机盐0.05%~0.12%，其余为水，其中所述碳源为葡萄糖，蔗糖中的一种或多种混合；所述无机盐为钠盐，钾盐，或者镁盐中的一种或几种混合。

7.根据权利要求3所述的共生真菌在铁皮石斛组培与种植阶段的应用，其特征在于所述铁皮石斛苗的无菌组培培养基包含如下质量分数的组分：马铃薯煮汁15%~25%，1/2MS培养基，碳源2%~5%，肌醇0.06%~0.1%，琼脂粉0.5%~1%，pH为5.0~6.5。