[发明专利]一种制备CIK细胞的方法

权利要求书

1.一种制备CIK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、从外周血中采集和分离单个核细胞；

b、将步骤a得到的单个核细胞置于适于淋巴细胞的培养基中，除去单核细胞，悬浮细胞加入CD3单克隆抗体、IL-2，IFN-γ，将淋巴细胞培养成CIK细胞；

c、在步骤b的培养液中培养8-15天后，再加入IFN-α、IL-2继续培养2-6天。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c培养液中IFN-α的浓度为100u/ml-1000u/ml，IL-2的浓度为100u/ml-500u/ml。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤c培养液中I FN-α的含量为500u/ml，继续培养的时间为3天。

4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤a中所述分离单个核细胞是经人淋巴细胞分离液密度梯度分离，经贴壁除去单核细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤b中培养基为无血清培养基。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤b中细胞浓度为0.5×10⁶/ml-1.5×10⁶/ml，CD3单克隆抗体10ng/ml-70ng/ml，IL-2浓度为100u/ml-500u/ml，IFN-γ浓度为100u/ml-1000u/ml，培养时间为72h以上。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤b中细胞浓度为1×10⁶/ml，CD3单克隆抗体50ng/ml，IL-2浓度为300u/ml，I FN-γ浓度为1000u/ml。

8.一种如权利要求1至7任一所述方法制备的CIK细胞。