[发明专利]一种牛CSRP3基因单碱基突变的检测方法

权利要求书

1.一种牛CSRP3基因单碱基突变的检测方法，其特征在于，以包含CSRP3基因的待测秦川肉牛和中国荷斯坦奶牛全基因组DNA序列为模板，设计CSRP3基因特异性引物，在PCR反应程序下进行扩增，扩增后的特异性PCR产物经检测出现目的带时，直接用限制性内切酶HhaI消化PCR产物，然后再进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结果发现3种不同条带，分别对应着3种不同基因型，挑取不同带型送测序验证，利用生物信息学方法，将测序结果与NCBI公布的序列进行比较，发现该CSRP3基因第2外显子区域即第14832位发生了A＞T突变；

  所述的牛CSRP3基因特异性引物为：

上游引物CSRP3-GSP-F：  5'- CACAGGTCAGGAATCAAAG -3'  19bp；

下游引物CSRP3-GSP-R：  5'- GCAAAGGTCAAACAATAGG -3'  19bp；

所述的PCR 反应体系为：

总反应体系为15 μL，其中包括2×Reaction Mix 7.5 μL，ddH₂O 6.1 μL，上游引物CSRP3-GSP-F 0.3 μL，下游引物CSRP3-GSP-R 0.3 μL，Golden DNA polymerase 0.3 μL，含CSRP3基因序列的DNA模板0.5 μL；

所述的PCR反应程序为：

95℃预变性5 min，94℃变性30 s，60℃退火40 s，72℃延伸40 s，共36个循环，72℃充分延伸10 min，最后16℃保存待用。

2.根据权利要求1所述的检测牛CSRP3基因单碱基突变的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的琼脂糖凝胶浓度为3%。