[发明专利]一种NOD/SCID小鼠异种移植物抗宿主病模型的建立方法

权利要求书

1.一种NOD/SCID小鼠异种移植物抗宿主病模型的建立方法，通过以下步骤实现： 

（1）活化的人PBMCs制备：取正常志愿者外周血标本，肝素抗凝，应用人淋巴细胞分离液分离制备外周血单个核细胞，用含10%胎牛血清的RPMI1640重悬细胞至细胞终密度为2×10⁶/ml，加入PHA和白介素-2共培养7天； 

（2）NOD/SCID小鼠造模：实验前1周取6周龄无特定病原体级NOD/SCID雄性小鼠，饲养于SPF级层流柜中，饲料及饮用水均经无菌处理，并在饮用水中加入庆大霉素32×10⁴U/L和红霉素250mg/L，小鼠输入活化的人PBMCs当天作为第0天，第0天前面的时间均以“-”表示，于-3至-1天进行环磷酰胺联合抗小鼠CD122单克隆抗体预处理，预处理后小鼠分为两组，每组6只，一组为实验组，一组为对照组，实验组小鼠中每只输入制备好的活化人PBMCs，对照组小鼠输入磷酸盐缓冲液，之后每天定期观察小鼠体重、腹泻、皮肤GVHD表现、活动情况；

（3）小鼠人白细胞数量含量植入检测：于第10天取小鼠血50μl，小鼠血进行抗人CD45 FITC标记，流式细胞术检测人CD45阳性白细胞数量含量；取小鼠脾脏，制备单细胞悬液，进行抗人CD45 FITC标记，流式细胞术检测人CD45阳性白细胞含量；

（4）小鼠GVHD靶器官的病理表现：待小鼠自然死亡后，取小鼠的肝脏、小肠和肾脏等各个器官进行常规石蜡包埋、切片，常规苏木素-伊红染色，查看各脏器中GVHD病理表现，并用抗人CD45单克隆抗体对各脏器进行免疫组化检测，查看人淋巴细胞在各脏器中的浸润情况。

2.根据权利要求1所述的一种NOD/SCID小鼠异种移植物抗宿主病模型的建立方法，其特征在于，步骤（2）皮肤GVHD表现是指毛发脱落、红斑。