[发明专利]检测食品中沙门菌的环介导等温扩增方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测食品中沙门菌的环介导等温扩增方法，其特征在于以沙门菌HisJ基因为靶基因，使用四条环介导等温扩增特异性引物检测沙门菌，所述四条环介导等温扩增特异性引物序列如SEQ ID NO1-4所示。

2.根据权利要求1 所述检测食品中沙门菌的环介导等温扩增方法，其步骤如下：

A、以水煮裂解法提取鼠伤寒沙门菌基因组DNA：取细菌悬液1ml 8,000 × g离心5分钟，沉淀使用PBS悬浮并洗涤；接着再用8,000 × g离心获取沉淀并使用100 μl超纯水重悬细菌；使用煮沸法裂解细菌，即细菌悬浮液在100 ℃ 煮沸 10 min，12,000 × g离心3分钟，吸取上清作为模板；

B、将序列分别如SEQ ID NO1-4所示的一组4条引物SALFIP﹑SALBIP﹑SALF3和SALB3C与反应试剂组合，进行环介导等温扩增检测；

其反应体系为 25 μL，体系组成：引物SALFIP 和 SALBIP 各1.6 μM，引物SALF3和SALB3C 各0.4 μM，dNTPs 为1.6 mM， 硫酸镁为6 mM，甜菜碱为1 M，8 U的Bst DNA 聚合酶大片段，1×ThermoPol 缓冲液，和2 μl的样品基因组DNA；

其反应程序：混合液在63 ℃ 孵育 60分钟后，反应液在80 ℃加热3分钟终止，观察。

3.一种沙门菌检测试剂盒，其特征在于包括：

试剂A: 2×预混反应缓冲液12.5×20 μL；

试剂 B: 反应酶液1×20 μL；

试剂 C: 预混引物干粉，在使用前加入40 μL超纯水，2×20 μL；

试剂D为阴性对照1 mL；

试剂E为阳性对照1 mL；

试剂F 为SYBER Green I 1×20 μL。

4.一种沙门菌检测试剂盒，其特征在于包括：

试剂A：10×ThermoPol 缓冲液50 μL，10 mM dNTPs 80 μL，1 M 硫酸镁3 μL，5 M甜菜碱100 μL，超纯水17 μL；

试剂 B：8 U Bst DNA 聚合酶大片段20μL；

试剂 C：引物SALFIP 和 SALBIP 干粉各0.8 nmol，引物SALF3和SALB3C干粉各0.2 nmol；

试剂 D：超纯水1 mL；

试剂 E：高纯鼠伤寒沙门菌ATCC 14028s基因组模板1 mL (10 ng/μL)；

 试剂F：10000×SYBER Green I 2 μL， DMSO 18 μL。