[发明专利]榛子叶片和花芽总RNA提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物组织中提取总RNA的方法，特别涉及一种从富含多糖、多酚、蛋白质等次生代谢产物的植物组织中提取总RNA的方法。

背景技术

榛属于榛科(Corylaceae)榛属(Corylus L)树种，是珍贵的木本粮油资源，榛仁含脂肪、蛋白质、碳水化合物、还含有维生素C、E和多种矿物质，榛子的果壳可以作为制造活性碳的原料。树皮和果苞含单宁，可制栲胶，榛子树叶、树皮和果仁中发现有抗癌物紫杉醇，具有很高的经济价值(张宇和，柳鎏，等.中国果树志[M].北京：中国林业出版社.2005：1-248.聂洪超，孙万河，等.杂交榛子生产上存在的问题及发展建议[J].北方果树.2010，(6)：46-47.)。

近年来，随着分子生物学的日益普及，国内外也逐渐开始利用分子生物学手段SSR(魏鑫，魏永祥，王颖，等.平欧杂种榛ISSR反应体系的优化与验证[J].北方园艺.2010，(4)：125-128.Kahraman Gürcan，Shawn A.Mehlenbacher.Development ofmicrosatellite marker loci for European hazelnut(Corylus avellana L.)from ISSRfragments[J].Mol Breeding.2010，(26)：551-559.)、RAPD(Shawn A.Mehlenbacher，Rebecca N.Brown，Eduardo R.Nouhra，Tufan Gükirmak，Nahla V.Bassil，ThomasL.Kubisiak.A genetic linkage map for hazelnut(Corylus avellana L.)based on RAPD andSSR markers[J].Genome.2006，(49)：122-133.)、RT-PCR以及免疫组织定位(D.Rigola，M.E.Pè，M.Sari-Gorla.A cDNA clone from hazelnut(Corylus avellana L.)encoding a lowmolecular weight heat shock protein expressed in the reproductive structures[J].Sex PlantReprod.1998，(11)：29-30.)等技术对榛子的物种遗传多样性、亲缘关系、基因克隆、蛋白定位等进行研究。而从榛子中提取高质量的总RNA是进行这些研究的基础和关键。

榛子叶片以及花芽富含多糖、多酚、蛋白质等次生代谢产物，多糖的很多理化性质与RNA相似，很难将其分开，而多酚易被氧化成褐色的醌类物质，会使RNA降解，RNase和多酚氧化酶都属于蛋白质，要获得完整的、高质量的总RNA就必须能够去除蛋白，次生代谢产物则易与RNA结合，阻碍RNA的分离。因此，去除多糖、蛋白和次生代谢物质、抑制多酚的氧化是榛子总RNA提取成败的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种从植物组织中提取总RNA的方法，该方法特别适用于从富含多糖、多酚、蛋白质等次生代谢产物的植物组织榛子中提取总RNA。

本发明所提供的从植物组织中提取总RNA的方法称为改良CTAB法，包括如下步骤：

1)将植物组织样品与聚乙烯吡咯烷酮和维生素C混合后，再加入液氮研磨成粉末；所述植物组织样品、所述聚乙烯吡咯烷酮和所述维生素C的配比为0.2g∶0.01g∶0.01g；

2)将步骤1)得到的粉末加入到55-65℃的提取液中，55-65℃水浴10min，得到样品混合液；