[发明专利]榛子叶片和花芽总RNA提取方法

权利要求书

1.从植物组织中提取总RNA的方法，包括如下步骤：

1)将植物组织与聚乙烯吡咯烷酮和维生素C混合后，再加入液氮研磨成粉末；所述植物组织、所述聚乙烯吡咯烷酮和所述维生素C的配比为0.2g∶0.01g∶0.01g；

2)将步骤1)得到的粉末加入到55-65℃的权利要求6所述提取液中，55-65℃保温10min，得到样品混合液；

3)对步骤2)得到的样品混合液进行RNA的抽提和RNA的沉淀，得到总RNA；所述抽提为用氯仿/异戊醇进行的抽提；所述氯仿/异戊醇是由氯仿与异戊醇按照24∶1的体积比混合得到的混合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氯仿/异戊醇在抽提体系中体积百分含量为50％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述RNA的沉淀包括用LiCl对所述RNA进行沉淀的步骤；所述LiCl在沉淀体系中的终浓度为2M。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述RNA的沉淀还包括用无水乙醇对所述RNA进行沉淀的步骤。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述RNA的抽提和所述RNA的沉淀包括如下步骤：

a)向所述样品混合液中加入等体积的所述氯仿/异戊醇，混匀，于4℃12000r/min离心10min，回收上清液；

b)向步骤a)得到的上清液中加入等体积的所述氯仿/异戊醇，混匀，于4℃，12000r/min离心10min，回收上清液；

c)向步骤b)得到的上清液中加入LiCl，使其终浓度为2M，混匀后于4℃放置过夜，于4℃12000r/min离心30min，得到RNA沉淀；

d)将步骤c)所得的RNA沉淀用75％乙醇清洗，得到总RNA的粗提物；

e)将步骤d)得到的总RNA的粗提物用SSTE缓冲液溶解，加入等体积的所述氯仿/异戊醇，混匀，于4℃，12000r/min离心10min，回收上清液；

f)向步骤e)得到的上清液中加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，于-20℃放置2h，于4℃，12000r/min离心30min，得到RNA沉淀；

g)将步骤f)得到的RNA沉淀用75％乙醇洗两次，再用无水乙醇洗一次，自然干燥，溶于100μl DEPC水，得到所述总RNA。

6.从植物组织中提取总RNA的提取液，其特征在于：所述提取液的溶剂为水，溶质为十六烷基三甲基溴化铵、Tris-Cl、乙二胺四乙酸、三盐酸亚精胺、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、β-巯基乙醇；所述十六烷基三甲基溴化铵在所述提取液中的含量为每100ml所述提取液中含有3g所述十六烷基三甲基溴化铵，所述Tris-Cl的终浓度为100mM，所述乙二胺四乙酸的终浓度为25mM，所述三盐酸亚精胺在所述提取液中的含量为每100ml所述提取液中含有0.05g所述三盐酸亚精胺，所述聚乙烯吡咯烷酮在所述提取液中的含量为每100ml所述提取液中含有3g所述聚乙烯吡咯烷酮，所述氯化钠的终浓度为2M，所述β-巯基乙醇的终浓度为体积百分含量5％。

7.根据权利要求1-5中任一所述的方法，或权利要求6所述提取液，其特征在于：所述植物组织为榛子组织。

8.根据权利要求7所述方法或所述提取液，其特征在于：所述植物组织为榛子的幼叶、雄花芽或成熟叶片。