[发明专利]胰蛋白酶亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法有效
| 申请号： | 201110369066.4 | 申请日： | 2011-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN103122028A | 公开（公告）日： | 2013-05-29 |
| 发明（设计）人： | 黄晋江;赵晓蔚;陆海荣;黄青山 | 申请（专利权）人： | 复旦大学;上海高科联合生物技术研发有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/81 | 分类号： | C07K14/81;C07K1/22 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胰蛋白酶 亲和 层析 纯化 重组 spink6 蛋白 方法 | ||
1.胰蛋白酶亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法，其特征在于，其包括步骤：
(1)制备亲和层析介质：
将胰蛋白酶与亲和层析介质混合，偶联反应，制得胰蛋白酶亲和层析介质；
(2)人重组SPINK6蛋白用亲和层析介质进行纯化
将人重组SPINK6蛋白通过预先用pH7.0-9.0的缓冲液A平衡好的装有步骤(1)的胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱；
然后用pH7.0-9.0的缓冲液A清洗上样后的胰蛋白酶亲和层析柱；
再用pH 2.5-4.5的缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；
所述pH7.0-9.0的缓冲液A选自PBS、Tris-HCl、硼酸缓冲液中的一种或一种以上；
所述的pH 2.5-4.5的缓冲液B选自醋酸-醋酸钠、NaHPO4-柠檬酸、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的一种或一种以上。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的亲和层析介质选自交联琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、丙烯酰胺聚合物、聚醚砜或脱乙酰壳多糖中的一种或一种以上。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的pH7.0-9.0的缓冲液A平衡胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱包括如下步骤：将pH7.0-9.0的缓冲液A通过装有胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱，用量为层析柱体积的3-10倍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的pH7.0-9.0的缓冲液A清洗上样后的胰蛋白酶亲和层析柱包括如下步骤：用pH7.0-9.0的缓冲液A清洗上样后的胰蛋白酶亲和层析柱，用量为层析柱体积的3-10倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，人重组SPINK6蛋白通过胰蛋白酶亲和层析柱的流速为10-75cm/h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，pH 2.5-4.5的缓冲液B以10-55cm/h的流速将人重组SPINK6蛋白从层析柱上洗脱。
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