[发明专利]先天性眼球震颤基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其涉及一种先天性眼球震颤基因检测试剂盒，属于医学分子生物学领域。

背景技术

先天性眼球震颤(congenital idiopathic nystagmus，CIN)是一种非自主的、有节律的眼球震颤，出生后早期被发现，发病率约为1/1000～1/1500。由于眼球震颤严重损害视功能，双眼不停颤动或伴有代偿头位及头部摆动而影响外观，给患者的生活造成很大困扰。对于先天性眼球震颤的治疗，目前国内没有治愈的方法。由于先天性眼球震颤绝大部分伴发其它眼病，严重影响视力，只能够通过手术解决伴发眼病。

目前对于先天性眼球震颤的检测国内外尚无统一的标准和检测方法。由于不能早期检测，最终导致患者失明，严重影响了患者的生活质量，同时也给家人和社会带来很大的负担，也影响了全社会人口质量。

本发明的试剂盒能够早期诊断出先天性眼球震颤(包括妊娠期)，并且指导医生进行正确及时的判断并给予相应的治疗，可以根据检测结果在知情同意的原则下对患病胎儿选择性终止妊娠，同时也帮助CIN家系成员生育健康后代。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够实现对先天性眼球震颤快速检测的试剂盒。

本发明克服了先天性特发性眼球震颤的临床表现和遗传的异质性，利用c.163-1G＞T位点提供了一种可以迅速的检测先天性眼球震颤疾病，为先天性眼球震颤的基因诊断工作带来了显著的便利。为预防下一代发病并提高全社会人口质量作出巨大贡献，对于社会发展有更深远的意义。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术手段实现的：

本发明结合本研究家系的单纯性眼球水平震颤的临床表型分析，公开了一个与先天性特发性眼球震颤密切相关的易感基因的全新位点，即一个剪切位置c.163-1G＞T的改变，携带T碱基的为先天特发性眼球震颤易感人群(图5所示)。该致病位点为国际上首次报道，通过确定c.163-1G＞T位点的剪切突变导致家系中的眼球震颤患者发病，本发明利用该位点设计了可直接用于眼球震颤疾病检测的试剂盒。

本发明的一种先天性眼球震颤基因检测试剂盒，该试剂盒包括：10μM dNTPs，10×PCR反应缓冲液，DNA聚合酶，PCR扩增引物对和双蒸水，其特征在于：所述的PCR扩增引物对由引物1和引物2组成，其中，引物1如SEQ ID NO：1所示，引物2如SEQ ID NO：2所示。

在本发明的具体实施例中，PCR扩增反应条件优选如下：

反应体系：样品模板150ng，10×PCR反应缓冲液5μl，10μM dNTPs 0.5μl，5U/μl DNA聚合酶0.5μl，10pmol引物12μl，10pmol引物22μl，用双蒸馏水补至40μl；

PCR扩增条件：95℃变性5min，后进入主循环94℃变性30s，60℃30s，72℃延伸30s，共30个循环，然后72℃延伸10min，4℃保存。

优选的，所述的DNA聚合酶为Taq PlusI DNAase。

本发明PCR检测试剂盒中的各种组分都可从商业途径购买得到，所用到的引物都可采用自动DNA合成仪合成得到。

本发明一种先天性眼球震颤基因检测试剂盒的应用方法如下：

(1)按照常规方法提取待检测样品的DNA模板；

(2)进行PCR扩增反应；

(3)将PCR扩增产物经1％琼脂糖电泳分析；

(4)将所得PCR扩增产物进行测序分析，测序图谱分析软件联合NCBI基因库序列分析突变位置，测序峰图与正常对照者测序峰图(图4所示)进行比较并结合患者测序峰图(图2、图3所示)做出是否为先天性眼球震颤患者的判定。

本发明的c.163-1G＞T可以对CIN高风险胎儿进行准确的产前诊断，利用该突变作为潜在的候选靶位，对先天性眼球震颤做出快速检测。在知情同意的原则下对患病胎儿选择性终止妊娠是帮助CIN家系成员生育健康后代的可行办法。

附图说明

图1为该眼球震颤家系的遗传家系图谱；

图2为家族中女性患者测序峰图；

图3为家族中男性患者测序峰图；

图4为人群中正常对照者测序峰图；

图5为突变前后由于剪切异常引起基因序列两种不同的编码改变。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。