[发明专利]高纯度甾体生物碱计明胺的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学。具体涉及一种以中药材藜芦为原料制备高纯度甾体生物碱计明胺的方法。

背景技术

藜芦是百合科(Liliaceae)藜芦属(Veratrum)植物，广泛分布于北半球温带，中国有十余种之多。本属多种植物可供药用，但多数具有不可忽视的毒性。该属植物有抗菌，抗真菌和杀灭寄生虫等作用，可用于治疗高血压、血吸虫、钩虫、丝虫、中风、癫痫、疟疾、骨折等疾病。

藜芦的药理作用同它的化学成分是密不可分的。藜芦的化学成分十分复杂，主要包括甾体生物碱化合物、芪类化合物、二肽类、黄酮类及其它类化合物。藜芦的化学成分中，甾体生物碱是是研究最早，生物学活性研究较深入的一大类组份，其中计明胺衍生物是最主要的活性成分之一。

计明胺(Germine)是白色针状结晶，无臭，口感微苦，分子式为C₂₇H₄₃O₈N，熔点：221.5～223℃，旋光：(95％乙醇)，(c＝1.13 10％醋酸)。计明胺不溶于水，溶于甲醇。计明胺结构上属于异甾体生物碱类，结构式如下：

计明胺药理作用尚未见文献报道，但其酯类衍生物如计米定、乌苏瑞宁等药理作用十分显著，具有抗血栓、抗凝血、抗血小板聚集等作用。因此，从计明胺出发，通过半合成可以制备出一系列计明胺骨架的酯型生物碱衍生物，获得了计明胺3、7、15、16位羟基的部分衍生化产物，发现这些衍生物具有更强的抗血栓能力，从而有效的提高计明胺的生物利用度，为计明胺相关新药的开发提供了广阔的前景。因此，计明胺的生产制备对更好的利用藜芦资源具有重要意义。

目前，计明胺制备方法主要是从藜芦原料中直接提取，经过繁琐的萃取、层析等分离纯化过程而获得，费时费力，而且消耗大量溶剂。资料表明，藜芦中的计明胺含量并不高，从藜芦中直接获得计明胺收率较低，而计明胺型甾体总生物碱的含量大大高于计明胺，且计明胺型甾体总生物碱的分离纯化方法比较成熟，相对简单，此外计明胺型甾体总生物碱较易水解，因此从计明胺型甾体总生物碱出发进行水解而获得计明胺是一种有效的途径。

发明内容

本发明公开了一种以下式表示的甾体生物碱计明胺(Germine)的高纯度制备方法。该方法拟在无机碱的水溶液中水解计明胺型甾体总生物碱，具体的是，将藜芦药材原料粉碎、乙醇回流提取、干燥得到浸膏、酸溶液溶解、乙醚脱脂、氯仿萃取、浓缩得到藜芦甾体总生物碱、总生物碱再经碱液水解、结合色谱柱分离工艺制备计明胺，即柱色谱纯化、重结晶、干燥，最终制得单体成品，以本方法制成的计明胺纯度可达90％以上，产品可用作药物原料或计明胺衍生物的制备前体。本发明通过下述技术方案实现：

一种高纯度甾体生物碱计明胺的制备方法，其具体步骤如下：

A.藜芦药材原材料的提取

取藜芦植物的干燥根茎粉碎后，用体积比为65～95％乙醇回流提取3～4次，每次1～2小时，合并提取液，过滤浓缩至稠膏状，干燥，得到浓缩物；

B.藜芦总生物碱的富集

将步骤A得到的浓缩物以其10～12倍质量的酸溶液溶解，得到的溶解液经过滤后用乙醚萃取脱脂，再用碱溶液调pH至8～10，用氯仿萃取，减压回收溶剂近干得到生物总碱；

其中：所述的酸溶液为1～5wt％酒石酸或5～10wt％盐酸；

C.藜芦总生物碱水解

将步骤B得到的生物总碱用质量体积比1∶10～12.5的无水乙醇溶解，在搅拌状态下，用碱溶液调pH为10～14并保持，在45～75℃水解2～6小时，氯仿萃取，合并有机层，减压回收溶剂至干燥得粉末；

D.色谱柱纯化

将步骤C得到的粉末加入使其刚好溶解的甲醇，并加入与粉末等质量的100～200目硅胶，混匀后烘干，再以粉末∶200～300目硅胶的质量比为1∶30～50的比例装柱，进行硅胶色谱柱层析，以体积比为40∶1∶0.1的氯仿∶甲醇∶二乙胺为流动相洗脱，薄层层析跟踪检测，收集计明胺洗脱液，并减压浓缩至干，重结晶，过滤，干燥，得到高纯度计明胺。

优化的，在上述制备方法中，步骤B中所述的碱溶液为下述溶液中的一种：10wt％NaOH、10wt％KOH、浓氨水。

优化的，在上述制备方法中，步骤B中所述的酸溶液为5wt％酒石酸或10wt％盐酸。

优化的，在上述制备方法中，步骤C中所述的碱溶液为NaOH溶液或KOH溶液，浓度为0.2～0.6mol/L。

优化的，在上述制备方法中，步骤C中所述浓度为0.4～0.5mol/L。