[发明专利]一种制备内源性洋地黄因子的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种制备内源性洋地黄因子的方法，本发明方法将超滤技术及抗体技术有机的结合，可以专一地将内源性洋地黄样因子从组织中分离出来，解决了长久以来由于其在组织内含量过低，并且相似分子量杂质过多，而造成的分离困难的难题。本发明方法具有操作简单方便，特异性强等优点。

主权项

一种制备内源性洋地黄因子的方法，其特征在于： （1）取胎盘，切成块状，用液氮冷冻，保存于‑80℃； （2）冷冻胎盘切片后放入匀浆器中，将匀浆器放入液氮罐中50‑70秒后，取出匀浆器，在1400转/分钟‑1600转/分钟下，匀浆4‑6分钟； （3）取出匀浆组织，加入等体积的有机溶剂，混合均匀，在1400转/分钟‑1600转/分钟下离心4‑6分钟，静置； （4）取上清液，回收有机溶剂至尽，用超滤膜离心超滤，在2800转/分钟‑3200转/分钟下离心8‑12分钟，保留透过液； （5）透过液中加入地高辛抗体，混合均匀，室温下放置25‑35分钟，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟‑1200转/分钟下离心超滤8‑12分钟，保留未透过物质，透过液弃去； （6）未透过物质加入甘氨酸溶液，混合均匀，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟‑1200转/分钟下离心8‑12分钟，透过液浓缩，得到内源性洋地黄因子； 或者取血加入等体积的有机溶剂，混合均匀，在1400转/分钟‑1600转/分钟下离心4‑6分钟，静置；取上清液，回收有机溶剂至尽，用超滤膜离心超滤，在2800转/分钟‑3200转/分钟下离心8‑12分钟，保留透过液；透过液中加入地高辛抗体，加入地高辛抗体的体积与透过液体积等量，混合均匀，室温下放置25‑35分钟，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟‑1200转/分钟下离心超滤8‑12分钟，保留未透过物质，透过液弃去；未透过物质加入甘氨酸溶液，甘氨酸的浓度为0.3摩尔/升，体积与未透过物质体积等量，混合均匀，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟‑1200转/分钟下离心8‑12分钟，透过液浓缩，真空浓缩，真空度为‑0.1MPa，浓缩温度为40‑50℃，得到内源性洋地黄 因子。