[发明专利]一株小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株JSL3H3，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20786。此细胞株分泌的单克隆抗体，对小肠结肠炎耶尔森氏菌具有较好的特异性和检测灵敏度。本发明合成了小肠结肠炎耶尔森氏菌完全抗原，并将它与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株JSL 3H3。此细胞株分泌的单克隆抗体，对小肠结肠炎耶尔森氏菌具有较好的特异性，本发明成果可用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性检测，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

耶尔森氏菌属属于肠杆菌科，由三种人类致病菌组成：鼠疫耶尔森氏菌(鼠疫病原体)，假结核耶尔森氏菌和负责人肠道耶尔森氏菌病的小肠结肠炎耶尔森氏菌。肠型耶尔森菌病是由于食用受污染的食物或水引起的食源性疾病，可通过粪-口途径在人群之间传播。肠型耶尔森菌病通常以在肠道中开始的自限性急性感染为特征，并且通常限于回盲肠交界处。腹泻是小肠结肠炎耶尔森氏菌感染的主要症状。此外，小肠结肠炎耶尔森氏菌还可以引起不同的临床症状，例如皮疹，结膜炎，急性器官衰竭和中毒性休克综合症，也可能发生更严重的感染和败血症，尤其是在新生儿，老年人和免疫功能低下的患者中。小肠结肠炎耶尔森氏菌在世界范围内广泛分布，在寒冷和温带地区发病率更高。大多数与人类耶尔森氏菌病相关的小肠结肠炎耶尔森氏菌菌株均属于2/O：9、4/O：3、2/O：5,27、3/O：3和1B/O：8血清型。据统计，小肠结肠炎耶尔森氏菌是法国和欧洲仅次于弯曲杆菌和沙门氏菌的第三大细菌性腹泻病原体。

目前，通过从粪便培养物中直接分离肠致病性耶尔森氏菌，并在特定的肉汤中富集，然后再在头孢磺啶-氯苯酚-新生霉素的半选择性培养基上进行分离，生化鉴定，即可检出小肠结肠炎耶尔森氏菌。然而，在选择性培养基上进行分离，需要耗时的富集步骤。一些分子技术应用于小肠结肠炎耶尔森氏菌分析检测，例如DNA菌落杂交，PCR，实时PCR，多基因座序列分型和脉冲场凝胶电泳等。但是，其中大部分技术都需要分离细菌或富集步骤，还需要特定的设备，及专业的操作人员。免疫分析由于操作简单、快速、实时检测、反应灵敏、价格便宜等优点广泛地应用于食源性致病菌分析检测，为食源性致病菌提供另一种检测途径。

发明内容

本发明的目的是提供一株小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。

本发明的第一个目的是提供一株小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株JSL 3H3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20786。

本发明的第二个目的是提供小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.20786的单克隆细胞株JSL 3H3分泌产生。

本发明的第三个目的是提供小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体的应用。

本发明的一种实施方式中，所述应用是食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分析检测。

本发明的一种实施方式中，一种试剂盒，含有所述的单克隆细胞株JSL3H3。所述试剂盒在检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的中的应用。

本发明的第四个目的是提供小肠结肠炎耶尔森氏菌完全抗原的制备方法。

本发明的小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选方法，主要包括以下步骤：