[发明专利]一株曲安奈德单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株曲安奈德单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌曲安奈德单克隆抗体杂交瘤细胞株STD 6B11，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20783。此细胞株分泌的单克隆抗体，对曲安奈德具有较好的特异性和检测灵敏度。本发明合成了曲安奈德半抗原，制备了曲安奈德完全抗原，并将它与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株STD 6B11。此细胞株分泌的单克隆抗体，对曲安奈德具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀为0.49ng/mL)。本发明成果可用于建立猪肉和其他含有曲安奈德的食品中曲安奈德含量的免疫检测方法，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株曲安奈德单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

曲安奈德是一种常见的糖皮质类激素，具有抗过敏、抗炎症、治疗皮肤病等作用。同时，糖皮质类激素还可以大幅提高动物的生长速度，因此常被不法养殖户大量用于经济动物的养殖，这些滥用行为会致使曲安奈德在动物体内存在不同程度的残留。研究表明，曲安奈德在食源性动物组织中的残留对消费者造成的健康风险很大，长期食用含有曲安奈德残留动物源食品会导致机体代谢紊乱。因此，建立有效的曲安奈德残留检测方法，对有效控制猪肉等产品中曲安奈德的残留以及保障广大人民群众的身体健康具有深远的意义。

对于兽药曲安奈德残留，目前缺少对其残留检测方法，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对曲安奈德的高效、快速的检测方法。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在兽药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测曲安奈德的前提是得到对曲安奈德具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对曲安奈德具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明内容

本发明的目的是提供曲安奈德单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

本发明的第一个目的是提供一株曲安奈德单克隆抗体杂交瘤细胞株STD6B11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20783。

本发明的第二个目的是提供一种曲安奈德单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCCNo.20783的杂交瘤细胞株STD 6B11分泌产生。

本发明的第三个目的是提供曲安奈德单克隆抗体的应用，建立曲安奈德含量的免疫检测方法，应用于食品中曲安奈德的检测。

本发明的一种实施方式中，所述应用是用于猪肉和其他含有曲安奈德的食品检测。

本发明的第四个目的是提供曲安奈德半抗原的制备方法：将曲安奈德加入溶于无水吡啶的琥珀酸酐中，水浴反应；停止加热后冷却至室温，将反应物转移到提前放入冷却的盐酸中，有大量白色沉淀析出；用去离子水洗涤数次，干燥后得到白色的固体，即为曲安奈德的半抗原。

进一步地，具体步骤如下：将570mg曲安奈德加入溶解有600mg琥珀酸酐的5mL无水吡啶中，60℃水浴反应6h；停止加热后冷却至室温，将反应物转移到提前冷却至4℃的20mL质量浓度为10％的盐酸中，有大量白色沉淀析出；用去离子水洗涤数次，干燥后得到白色的固体，即为曲安奈德的半抗原。