[发明专利]一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株FQJ 5G11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20784。本发明合成了硝呋烯腙半抗原，制备了硝呋烯腙完全抗原，并将它与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株FQJ 5G11。本发明获得的硝呋烯腙单克隆抗体细胞株可以用于免疫分析检测，其对硝呋烯腙有较好的检测灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

硝呋烯腙(Nitrovin)是一种抗生素，能够促进动物生长，它通过增加动物肠道粘膜的通透性，从而能有效地提高营养物质在动物消化道中的消化和吸收；硝呋烯腙还能有效抑制动物消化道内病原微生物对葡萄糖的利用，使其新陈代谢过程受阻，从而抑制和杀灭多种瘸原微生物，减少动物感染疾病的机会，提高抗病能力，因此硝呋烯腙在畜禽养殖方面有一定的应用。由于抗生素的耐药性、残留和二重感染的特性，所带来的弊端和危害已成为人类所面临的重大挑战。中华人民共和国农业部国家药品监督管理局公告(第193号)：食品动物禁用的兽药及其它化合物清单明确指出硝呋烯腙禁止使用。因此，研究建立食品中硝呋烯腙的残留检测方法具有重要意义。

对于硝呋烯腙兽药残留的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对硝呋烯腙的高效、快速的检测方法。

酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在兽药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测硝呋烯腙的前提是得到对硝呋烯腙具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对硝呋烯腙具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。此杂交瘤细胞株分泌的硝呋烯腙单克隆抗体对硝呋烯腙具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为9.1ng/mL)，可以用于建立硝呋烯腙的免疫学检测方法，检测食品中硝呋烯腙的残留。

本发明的技术方案，一株分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株FQJ5G11，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20784。

本发明提供了上述一种分泌硝呋烯腙单克隆抗体的杂交瘤细胞株FQJ5G11的制备方法，包含如下步骤：

(1)使用硝呋烯腙半抗原制备硝呋烯腙完全抗原，将获得的硝呋烯腙完全抗原制备成含抗原弗氏佐剂与含抗原不完全弗氏佐剂；

(2)将得到的含抗原弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用含抗原完全弗氏佐剂，加强免疫采用含抗原不完全弗氏佐剂；

(3)将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中硝呋烯腙抗体含量高的获得免疫的小鼠；

(4)将筛选出的小鼠用含抗原不完全弗氏佐剂再进行最后一次加强免疫，然后通过腹腔注射进行冲刺免疫，冲刺免疫采用不含弗氏佐剂的硝呋烯腙完全抗原进行；