[发明专利]一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用。所述鲎试剂冻干微球包括鲎的阿米巴细胞提取物和活性剂，所述活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇和甘氨酸。各组分间相互配合，促进鲎试剂成型，并提高成型后硬度，同时保护预冷期、冻干期以及储存期鲎试剂的活性，从而使得鲎试剂冻干微球硬度高、表面光滑不易破碎掉屑，且稳定性高，便于后续进行自动化或者手动分装、保存。

技术领域

本发明属于生物制品冷冻技术领域，涉及一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用。

背景技术

鲎试剂是由海洋生物鲎的血液阿米巴细胞的提取物制成的生物监测试剂，鲎试剂含有能被细菌内毒素(脂多糖)和真菌葡聚糖激活的C因子、B因子、G因子、凝固酶原和凝固蛋白原等，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和(1,3)-β-D-葡聚糖。

目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测，但鲎试剂在液体状态下不稳定、易污染，目前市面上的鲎试剂均采用常规的真空冷冻干燥处理后进行保存和运输，如CN102901726A公开了血液细菌内毒素检测试剂盒的制备和应用，其中涉及一种特异性鲎试剂及其制备方法，所述制备方法包括采血、分离细胞、裂解细胞、分离细胞壁、加促活剂和G因子抑制剂配制半成品，再经灌装、冷冻干燥和封口，制得特异性鲎试剂成品；CN1621841公开了一种抗干扰鲎试剂的制备工艺，所述工艺包括(1)制取P型抗干扰鲎试剂半成品，(2)采用除热原凝胶，过柱洗脱除去脂肪族二元醇类的热原，(3)用无热原水将制备好的脂肪族二元醇类溶解配成100mg/mL的溶液，取若干P型抗干扰鲎试剂半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇类，加入1％～10％增活剂，将其分装到安瓿或西林瓶中后，放入冷冻干燥机冻干，封口或压盖制成品。

由上可知，常规的真空冷冻干燥方法将鲎试剂在西林瓶或者安瓿瓶中进行冻干，获得粉末状的鲎试剂，但粉末状的鲎试剂难以实现精准分装或者简化操作，从而难以集成于检测卡或者芯片等即时检验(point-of-care testing，POCT)产品，此外，操作时需破碎容器封口，存在割伤等风险。

综上所述，提供便于分装和精确称量的鲎试剂，对于简化检验科人员的操作时间和提高POCT产品的便携性和准确性具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用，所述冻干微球的硬度高、不易破碎掉屑，且稳定性高，便于后续进行自动化或者手动分装、保存，所述制备方法简单，能够制备低含水量且活性高度均一的冻干微球。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种鲎试剂冻干微球，所述鲎试剂冻干微球包括鲎的阿米巴细胞提取物和活性剂；

所述活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇和甘氨酸。

本发明的鲎试剂冻干微球中，聚乙烯吡咯烷酮具有较高的玻璃化温度，能优先从蛋白质表面析出，使蛋白质溶液黏度升高从而阻止其他小分子(如糖及多羟基化合物)的结晶，具备促进鲎试剂成型以及保护活性的作用；乳糖能够阻止蛋白质二级结构改变，对冻干处理过程中及储存期内蛋白质的伸展和聚集具有显著作用；甘露醇作为骨架剂，促进鲎试剂成型，还具备保护蛋白质活性的作用；棉子糖具备较高的玻璃化温度、更低的引湿性且不具有还原性，能够有效保护蛋白质活性；聚乙二醇能够降低离子强度并抑制冷冻过程中pH值的剧烈变化，有效保护蛋白质活性；甘氨酸能够抑制冷冻过程中pH值的剧烈变化并升高蛋白质塌陷温度，同时提高冷冻期和储存期蛋白质活性。

综上所述，本发明中同时采用聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇和甘氨酸，不干扰鲎试剂的检测功能，且各组分间相互配合，促进鲎试剂成型，并提高成型后硬度，同时保护预冷期、冻干期以及储存期鲎试剂的活性，从而使得鲎试剂冻干微球硬度高、表面光滑不易破碎掉屑，且稳定性高，便于后续进行自动化或者手动分装、保存。