[发明专利]一种性传播疾病致病病原的核酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种性传播疾病(Sexually transmitted diseases，STD)致病病原的核酸检测试剂盒。本发明研究得到可基于CRISPR/Cas12a检测STD相关病原的特异性核酸序列位点，针对该位点可实现STD病原的快递、灵敏、特异定性检测，基于该技术构建了STD病原核酸检测方法和检测试剂盒，既能实现靶标单分子精准检测，还能够实现多位点同时检测，临床检测效果优异，对于STD病原的检测与筛查具有重要的意义和应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种性传播疾病致病病原的核酸检测试剂盒。

背景技术

性传播疾病(Sexually Transmitted Disease,STD)是在全世界范围内流行的一种最常见的传染病，其发病、流行与生活方式密切相关，是以性接触为主要传播方式的一组疾病。近二十年来性传播疾病的流行逐渐呈现出流行范围扩大、罹患年龄减低和严重程度加重的态势，已成为全人类必须共同面对的严峻公共健康问题。梅毒、淋病、生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性尿道炎、性病性淋巴肉芽肿和艾滋病8种STD被列为中国重点防治的性病。STD可由病毒、细菌和寄生虫引起，常见的病原体有几种：人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus，HIV)，沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)，苍白螺旋体(Treponema Pallidum，TP)，淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)，刚地弓形虫(Toxoplasma Gondii，TG)。为实现STD的早期检测并控制其传播风险，开发低成本、准确、高效、快速地检测STD病原的诊断方法非常重要。

常规的病原检测技术如(1)分离培养技术：病原体分离培养，特别是对于病原微生物和病毒的分离培养，是早期的病原体检测的金标准。但该方法分离培养耗时长，无法实现短时间内迅速得到检测结果，必须高度依赖检测实验室硬件及实验操作人员条件，且不适用于目前未有成熟培养手段的病原微生物和病毒的检测。(2)免疫学检测：以基于抗原-抗体的免疫反应，识别病原相关蛋白，从蛋白水平对病原体进行检测。该方法存在检测灵敏度较低，且特异性受环境等影响较大，检测的窗口期较长，无法满足诊疗需求，仅适用于初筛而不能作为及时确诊的依据，不能够识别同一类病原的不同亚型等问题。

基于分子的诊断方法可以提高检测抗性基因的速度和准确性，这对医院和社区环境中的感染控制、预防、治疗很有意义。目前分子诊断方法主要是聚合酶链反应(PCR)：包括普通PCR、等位基因特异性PCR、实时荧光定量PCR、PCR-Sanger测序技术、PCR-基因芯片技术等。PCR是从核酸水平对病原体进行检测，整个实验需要1～2小时完成。该方法的主要缺点在于进行PCR检测时需要依赖PCR仪或昂贵的实时定量PCR仪，及其它多种配套设备，以及专门的PCR实验室和专业操作人员。PCR检测无法实现即时检验、床旁诊断和无特定实验室检测条件的场景应用，因此无法满足基层、用户终端、现场的检验需求。同时，PCR检测可能存在假阳性和灵敏度不足等问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有STD病原检测技术的缺陷和不足，研究得到一种基于CRISPR/Cas12a系统的STD病原核酸检测位点，针对该位点利用CRISPR/Cas12a系统可实现STD病原的核酸检测，特异性好、灵敏度高，假阳性低。

本发明的目的是提供一种基于CRISPR/Cas12a系统的STD病原核酸检测位点及gRNA组合。

本发明另一目的是提供一种STD病原基因的CRISPR/Cas12a检测系统。

本发明再一目的是提供一种基于CRISPR/Cas12a系统的STD病原核酸的检测方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明研究发现一种基于CRISPR/Cas12a系统的STD病原核酸检测靶标位点，针对该位点可进行基于CRISPR/Cas12a系统的STD病原核酸检测，检测特异性好、灵敏度高。