[发明专利]一种丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针，其特征在于，结构如式I所示：

2.一种权利要求1所述的丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)式II化合物的制备：惰性气体保护下，将异佛尔酮、丙二腈、哌啶加入反应瓶中，乙醇为溶剂，加热搅拌回流，TLC跟踪至反应结束，将反应液降至室温后倒入冰水中析出沉淀，抽滤，用正己烷对滤渣进行重结晶处理，得到式II化合物；其中，所述的异佛尔酮与丙二腈的摩尔比为1:1～1:2；

(2)式III化合物的制备：惰性气体保护下，将式II化合物、对羟基苯甲醛及哌啶加入反应瓶中，乙醇为溶剂，加热搅拌回流，TLC跟踪至反应结束，将反应液降至室温，浓缩反应液，采用硅胶柱层析提纯，得到式III化合物；其中，所述的式II化合物与对羟基苯甲醛的摩尔比为1:1～2:1；

(3)式IV化合物的制备：惰性气体保护下，将式III化合物、乌洛托品(六亚甲基四胺)加入反应瓶中，三氟乙酸为溶剂，加热搅拌回流，TLC跟踪至反应结束，将反应液降至室温后倒入6M HCl中搅拌10min，再用二氯甲烷进行萃取，饱和食盐水洗涤2～3次，取二氯甲烷层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，采用硅胶柱层析提纯，得到式IV化合物；其中，所述的式III化合物与乌洛托品的摩尔比为1:1～1:2；

(4)式I化合物的制备：将式IV化合物与2,4-二硝基苯磺酰氯、三乙胺加入反应瓶中，二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈为溶剂，室温搅拌反应，TLC跟踪至反应结束，浓缩反应液，采用硅胶柱层析提纯，得到式I所示的荧光探针纯品；其中，所述的式IV化合物与2,4-二硝基苯磺酰氯的摩尔比为1:1～1:2。

3.根据权利要求2所述的丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中TLC所用的展开剂是体积比为5:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂；步骤(2)中TLC所用的展开剂是体积比为30:1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂；步骤(3)中TLC所用的展开剂是体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂；步骤(4)中TLC所用的展开剂是体积比为3:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂。

4.根据权利要求2所述的丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中硅胶柱层析所用的洗脱剂是体积比为50:1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂；步骤(3)中硅胶柱层析所用的洗脱剂是体积比为10:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂；步骤(4)中硅胶柱层析所用的洗脱剂是体积比为8:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂。

5.权利要求1所述的丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针在检测生物硫化氢中的应用。

6.根据权利要求5所述的丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针在检测生物硫化氢中的应用，其特征在于，通过以下步骤实现：在待检测体系中加入式I所示的荧光探针，使其终浓度为10μM，37℃下孵育1小时，通过检测体系荧光强度实现检测目的；待检测体系选用血浆、匀浆液或细胞培养基，当待检体系为血浆或匀浆液时，通过荧光分光光度计记录荧光强度；当待检测体系为细胞培养基时，通过激光共聚焦显微镜观察活细胞荧光成像。