[发明专利]一种磷脂检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种磷脂检测方法及应用，其中一种磷脂检测方法，其为用乙腈和乙酸铵洗脱；一种磷脂检测洗脱液，其包括，乙腈、乙酸铵，其中，按体积百分数计，所述乙腈为50％～95％，所述乙酸铵为5％～50％；一种磷脂检测方法的应用，其为用于检测磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、甘油磷脂酸、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱的检测。本发明提供的分析方法操作简便，分析的磷脂种类多，峰型好，保留时间短，方便快捷，可靠实用。

技术领域

本发明属于磷脂检测技术领域，具体涉及一种磷脂检测方法及应用。

背景技术

磷脂是生物膜的主要成分。根据其极性酰基头基，磷脂分为六类：磷脂酰胆碱(Phosphatidyl cholines,PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl ethanolamines,PE)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidyl serines,PS)、磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerol，PG)、甘油磷脂酸(phosphatidic acid,PA)和鞘磷脂(sphingolipid，SM),磷脂的Sn-2酰基链发生降解可以变成溶血磷脂，如溶血磷脂酰胆碱(lyso-phosphatidylcholine，LPC)。磷脂双分子层是细胞膜的基础结构,人们对磷脂的生命功能的认识始于生物膜的基本组成部分,几乎所有细胞在细胞膜和胞内膜水平所完成的功能都是直接或间接地受到磷脂定位及结构变化的影响,之后磷脂的重要功能被不断发掘出来。生物体内的膜的组成并不是稳定不变的,外界的扰动及生物体的内部变化都可能引起膜上磷脂组成的变化。对膜上磷脂变化的研究有助于侧面理解外界环境导致的细胞生长代谢机制的变化。秀丽隐杆线虫是一种国际公认的针对磷脂组学的研究型模式生物，膜脂质由结构脂质(膜脂如PL)和储存脂质(主要是中性脂质)组成，磷脂组成多样。极性头部组，甘油骨架，磷脂类或立体特异性的变化将强烈影响机体的生物学活性。

因此快速定量检测磷脂具有一定的必要性和实用性。关于磷脂的检测，国内外一般采用正相或反相液相色谱的方法，正相色谱多采用硅胶色谱柱，一般只对磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺响应较强，对其他种类的磷脂洗脱能力较弱，其次检测需要的平衡时间过长，不适用于快速分析复杂的生物膜磷脂。而反相色谱是根据磷脂化合物酰基链长度的不同导致的疏水性差异进行分离，故各大类磷脂很容易在同一时间段内被洗脱，从而导致峰型重叠。此外在检测器上也有报道质谱法检测磷脂，然而其价格高昂，维护成本高，磷脂分子电离出现抑制，影响峰型。相比而言，高效液相色谱蒸发光检测法操作简单，准确性高，成本低，已有研究对相关方法进行了探索，但都存在一些问题有待改进，如流动相大多采用正己烷和异丙醇，对色谱柱、液相泵、分流环等硬件损害大，会使其寿命缩短，且已报道的检测方法只能检测磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺等有限数量磷脂，或是平衡时间长、峰型拖尾、难分离导致定量不准，随着磷脂分子种类的增加，所需分离时间增加，选择合适的洗脱梯度和色谱参数，对兼具分离效果与分析效率至关重要。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种磷脂检测方法及应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种磷脂检测方法，其特征在于：用乙腈和乙酸铵洗脱。

作为本发明所述磷脂检测方法的优选方案，其中，所述洗脱为梯度洗脱。

作为本发明所述磷脂检测方法的优选方案，其中，所述梯度洗脱，其为0～2min时用第一体积比的所述乙腈和所述乙酸铵淋洗，2～20min时用第二体积比的所述乙腈和所述乙酸铵淋洗，再使用所述第一体积比的所述乙腈和所述乙酸铵淋洗；