[发明专利]一种利用鸡胚血管系统检测和评价结膜刺激性及粘膜刺激性的方法

说明书

技术领域

本发明属于结膜刺激性及粘膜刺激性技术领域，具体涉及一种利用鸡胚血管系统检测和评价结膜刺激性及粘膜刺激性的方法。

背景技术

随着生活水平的提高，越来越多的人开始使用个人护理和清洁用品，前者如皮肤用和眼用产品，后者如口腔清洁和护理产品。大多数消费者在使用这些产品过程中都非常关心其安全性问题，其中包括使用产品后无意接触眼睛产生的结膜和角膜刺激问题；以及口腔护理品对口腔粘膜和牙龈的刺激；女性护理产品对阴道粘膜的刺激等。因此，个人护理和清洁产品的监管要求必须对产品的健康危害进行检测。同时，在这些产品的研发过程中，粘膜刺激性的检测和评估也贯穿其中。例如对于候选原料(如植物提取物、合成化学品)和配方，通常需要反复测试其眼结膜刺激性和口腔粘膜刺激性，并希望能够精确定量不同配方或产品的刺激程度。此外，对于大量未知毒性特征的化学品，也需要准确了解包括结膜刺激性和粘膜刺激性在内的毒性特点，以用于危险化学品的分类和标识。

化学品、个人护理品或其它眼睛接触物质引起的结膜刺激性，主要指的是这些物质有意或无意直接接触眼睛后引起的眼结膜及其周围粘膜的可逆性炎性变化，这些物质如淋洗类化妆品、眼部和面部用化妆品、眼部药物、喷酒类农药、空气清新剂、空气颗粒物和漂浮物、PM2.5等。消费者通常希望购买的产品是符合产品安全标准要求的，而且更加希望产品无任何刺激性的或者是温和的，能够适用于皮肤敏感、婴幼儿等特殊人群。

个人护理和清洁用品引起口腔粘膜的刺激性，主要指的是用于牙齿、口腔、口唇等部位的产品，接触到口腔粘膜后引起的粘膜、口唇、牙龈及其周围组织的可逆性炎性变化，这些物质包括牙膏、漱口水、牙贴膜、牙胶等

由于卫生清洁、个人护理等产品使用频率的增加，上述粘膜刺激相关的不良反应的发生越来越普遍。另一方面，消费者对于产品安全性的要求也越来越高，因此有必要在现有的检测方法的基础上，建立一些更快速和更敏感的检测和评估方法。

现有的外源物质粘膜刺激性的方法可分为动物模型、细胞法和人体试验三类。

传统的动物模型检测结膜刺激性，也是将一定量的受试物滴入实验动物(通常为家兔)的眼睛内，经一定时间间隔后，观察受试动物眼睛结膜、角膜和虹膜的变化，以评估该受试物是否有眼刺激性。同样，传统检测口腔粘膜刺激性，是将一定量的受试物通过手术埋入实验动物(通常为金黄地鼠)的口腔颊囊内，经一定时间间隔后，处死动物，收集口腔颊囊组织，观察口腔粘膜的病理变化，以评估该受试物是否有口腔粘膜刺激性。采用动物作为试验对象检测消费品的安全性，其缺点是成本高、周期长，很少使用现代生物科技发展的成果，还给动物带来了极大痛苦，存在道德和伦理上的问题。除此之外，动物实验环境条件苛刻(动物需要饲养在恒温恒湿的室内环境)、动物质量要求严格(要求符合质量等级的要求)、检测门槛高(检测机构需要取得实验动物使用许可证)，又与人的实际使用情况相差太远，而且由于动物和人之间存在种属差异，使用动物皮肤评价人体皮肤的安全风险使结果的可信度降低。

随着大量新的物质用于药品和化妆品，我们需要更多的方法来评价这些物质的安全性。同时，为了遵循生命和医学研究中的3R原则(减少、优化和代替动物实验)，以及把现代生物科技的成果应用于人类健康危害评估(如细胞培养、组织工程、组学和基因技术等)。从10年前开始，全球范围内开展了面向21世纪的毒性测试为核心的毒理学的现代化计划。大量的非动物的替代方法应用于健康危害的检测和安全评估中，有的方法已被世界经济合作的发展组织(OECD)、欧洲替代方法验证中心(ECVAM)和美国替代方法部门间协调验证中心 (ICCVAM)等机构认可并定为检测指南。

目前的体外检测化学物质结膜刺激性的方法主要有OECD指南435、437、 460、492等，其中435是早期认可的替代方法，以离体兔眼为测试对象，已逐渐被不使用实验动物材料的方法取代。437是检测眼刺激的牛角膜混浊和渗透性试验，以屠宰场的废弃材料为试验系统检测化学品和产品的眼刺激性，其优点是适用于几乎所有原料和产品的检测，缺点是国内材料来源困难，主要评估角膜的损伤，无法检测结膜的刺激性。460是采用单层细胞培养的方法，主要适用于表面活性剂等化学品的检测，其缺点是不适用于检测难溶解、有颜色的化学物，也不适用于测试剂型和成份复杂的提取物、配方和成品。492是组织工程角膜的方法，需要使用商品化的人工角膜模型，目前国内尚无法生产类似产品，也无法有效进口，其次人工角膜模型价格昂贵，不适用于大量日常检测。