[发明专利]牛冠状病毒重组多表位抗原及其应用

说明书

本发明公开了牛冠状病毒重组多表位抗原，还公开了该牛冠状病毒重组多表位抗原在预防和诊断牛冠状病毒中的应用，属于分子免疫学领域。本发明的牛冠状病毒重组多表位抗原的氨基酸序列是牛冠状病毒BCoV S蛋白抗原表位的串联体。本发明将能引起中和抗体的牛冠状病毒重组多表位抗原作为免疫原或疫苗，免疫动物机体后能够产生针对牛冠状病毒BCoV的中和抗体，并能够在体外中和BCoV，阻止病毒感染动物机体。而且，本发明的牛冠状病毒重组多表位抗原还能够作为检测牛冠状病毒BCoV抗体或者多肽抗体的试剂。

技术领域

本发明涉及分子生物学及免疫学领域技术领域，具体涉及一种牛冠状病毒重组多表位抗原及其应用。

背景技术

牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是20世纪70年代发现的牛腹泻病原，我国于1985 年首次分离到。临床上主要表现为新生犊牛腹泻、拉血样粪便、成年牛冬季严重水样腹泻(有时伴有血和黏液)等特征。该病主要通过消化道和呼吸道传播，发病率高。一旦发病极易引起群体感染，并且诱发继发感染，给以集约化饲养为特点的养牛业造成巨大的经济损失。目前临床上主要以灭活疫苗和减毒活疫苗的防控为主，但灭活疫苗和减毒活疫苗存在生物危害性和遗传变异致使原疫苗效力丧失等问题。

表位疫苗是近年发展起来的一种新型疫苗，它是利用基因工程的手段，体外表达或人工合成病原微生物的抗原表位，将其作为一种疫苗使用。表位又称抗原决定簇，是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团，是能够与T细胞抗原受体或B细胞抗原受体特异性结合的基本单位，最终激起机体的免疫反应，形成对病原微生物的免疫能力，因此，表位疫苗符合未来疫苗的发展方向。

牛冠状病毒(BCoV)是单股正链不分段的RNA病毒，基因组大小约为32kb。基因组含有五种结构蛋白，分别为核衣壳蛋白(N,52kDa)，膜蛋白(M,25kDa)，纤突蛋白(S,180kDa)，小衣壳蛋白(E,8kDa)，血凝素酯酶蛋白(HE,65kDa)其中S蛋白主要负责病毒的吸附，介导病毒与宿主膜融合，诱导宿主免疫反应和病毒中和抗体。因此，可以选择S蛋白的抗原表位作为诊断抗原，用于BCoV抗体水平的检测和表位疫苗的研制。但目前尚未有关于牛冠状病毒表位疫苗的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种牛冠状病毒重组多表位抗原及其应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种牛冠状病毒重组多表位抗原，是具有如下氨基酸序列之一的多肽：

(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入而获得的仍具有抗原表位功能的蛋白衍生物。

所述一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入为不超过10个氨基酸残基的替换、缺失或插入。

本发明的第二方面，提供编码上述牛冠状病毒重组多表位抗原的基因，是具有如下核苷酸序列之一的多核苷酸：

(1)SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

(2)在严格条件下与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能的多肽的核苷酸序列。

本发明的第三方面，提供一种重组载体，其含有上述编码牛冠状病毒重组多表位抗原的基因。

进一步的，本发明还提供一种重组菌，其被上述的重组载体转化。

经重组载体转化的重组菌选自重组大肠杆菌或重组酵母菌。

本发明的第四方面，提供上述的牛冠状病毒重组多表位抗原或编码所述重组多表位抗原的基因在制备表位疫苗中的应用。