[发明专利]一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法

权利要求书

1.一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、制备海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯为萃取剂进行萃取处理，合并萃取液，减压浓缩得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

步骤二、反相硅胶柱层析制备肉豆蔻酸一次粗品：将获得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到肉豆蔻酸一次粗品；

步骤三、葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20层析制备肉豆蔻酸二次粗品：将肉豆蔻酸一次粗品以葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到肉豆蔻酸二次粗品；

步骤四、反相硅胶柱层析制备肉豆蔻酸一次精品：将获得的肉豆蔻酸二次粗品以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到肉豆蔻酸一次精品；

步骤五、正相硅胶柱层析制备肉豆蔻酸二次精品：将获得的肉豆蔻酸一次精品以正相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到肉豆蔻酸二次精品；

步骤六、PTLC制备肉豆蔻酸纯品：将获得的肉豆蔻酸二次精品进行PTLC，点样、展开，刮板，样品回收，保存于-20℃，得到肉豆蔻酸纯品。

2.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤一的具体方法为：海洋球石藻生长至稳定期，收获，冷冻干燥获得海洋球石藻藻粉，用质量分数为75％的乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，加入等体积的乙酸乙酯和水，反复萃取，收集乙酸乙酯相，合并、减压浓缩至干，获得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物。

3.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤二的具体方法为：将海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用适量的分析纯甲醇溶解，加入量以甲醇正好没过萃取物为宜，进行反相硅胶柱层析；依次用水，质量分数为25％的甲醇溶液，质量分数为50％的甲醇溶液，质量分数为75％的甲醇溶液，甲醇洗脱，每个梯度洗脱1.5L，流速控制为30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并肉豆蔻酸高浓度流分段，减压浓缩至干，获得肉豆蔻酸一次粗品。

4.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤三的具体方法为：将肉豆蔻酸一次粗品用适量甲醇溶解后，上葡聚糖凝胶柱SephadexLH-20，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，流速控制20S/drop，使用自动收集器收集各馏分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并21至25管的馏分，减压浓缩至干，获得肉豆蔻酸二次粗品。

5.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤四的具体方法为：将肉豆蔻酸二次粗品，依次采用质量分数为60％，70％，80％，90％，100％的丙酮溶液体系梯度进行RP C18反相硅胶柱层析，每个梯度洗脱200mL，流速控制为10mL/min，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并肉豆蔻酸高浓度流分段，减压浓缩至干，获得肉豆蔻酸一次精品。

6.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤五的具体方法为：将肉豆蔻酸一次精品经过正相硅胶柱层析：用硅胶粉拌样，硅胶用正己烷饱和后装柱，样品上柱后用正己烷乙醚的体系进行洗脱，所述正己烷和乙醚的体积比为50:1，添加2滴冰醋酸，收集馏分，合并63-67管，减压浓缩至干，获得肉豆蔻酸二次精品。

7.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法，其特征在于：所述步骤六的具体方法为：将肉豆蔻酸二次精品经过PTLC，最终得到肉豆蔻酸：采用高效薄层层析板，在体积比为：石油醚:乙酸乙酯＝15:1的展开剂中展开，前后两端显色，用刀片刮取中间部分，合并，用甲醇溶解，离心，收集上清液，减压浓缩至干，最终得到肉豆蔻酸。

8.一种如权利要求1-7中任一项所述的从海洋球石藻中提取肉豆蔻酸的方法提取的肉豆蔻酸在制备抗大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、副溶血性弧菌及金黄色葡萄球菌药剂中的应用。