[发明专利]一种潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法

权利要求书

1.一种潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，包括步骤：

1)将多孔纸质基底上残留的潜在指纹样本转移至SDS-PAGE胶上；

2)将指印样本上的目的蛋白转移至PVDF膜上；

3)将步骤2)处理后的PVDF膜浸入脱脂牛奶中封闭0.5-2h，然后清洗PVDF膜上过多的牛奶；

4)向步骤3)处理后的PVDF膜上滴加一抗溶液进行孵育，孵育完成后清洗过多抗体；

5)向步骤4)处理后的PVDF膜上滴加辣根过氧化物酶标记的二抗溶液进行孵育，孵育完成后清洗过多抗体；

6)向步骤5)处理后的PVDF膜上滴加显影液，暗箱中显影，得到清晰的指纹图像。

2.如权利要求1所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于，步骤1)中，SDS-PAGE胶的组成如下：4-5mL水、2-3mL 30％的丙烯酰胺、2-3mL浓度为1.5mol/L pH为8.8的Tris溶液、0.05-0.15mL 10％的SDS溶液、5-7μL TEMED。

3.如权利要求1或2所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤2)中采用湿转仪将目的蛋白转移至PVDF膜上。

4.如权利要求3所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：湿转时，设定电压110-130V，转移时间为20-40min。

5.如权利要求1或2所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤3)中脱脂牛奶的浓度为4-6％。

6.如权利要求1所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤3)、4)、5)中清洗均采用TBST缓冲液清洗；所述TBST缓冲液为含0.05％Tween-20的TBS缓冲液，TBS缓冲溶液为0.1M Tris-HCl，pH为7.5，含0.15M NaCl。

7.如权利要求1所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤4)中所述一抗溶液为兔抗人EGF、兔抗人溶菌酶、兔抗人皮离蛋白溶液中的任意一种，所述一抗溶液的浓度为0.01-0.03mg/mL。

8.如权利要求1所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤5)中所述二抗溶液为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG，所述二抗溶液的浓度为0.005-0.015mg/mL。

9.如权利要求1所述潜在指纹中蛋白质成分的提取及显现方法，其特征在于：步骤6)中所述显影液为pH为8.5的0.1M Tris-HCl含0.4-0.6mM鲁米诺、0.2-0.3mM对碘苯酚和2-5mM过氧化氢。