[发明专利]一种Cre和Flp依赖的逆向示踪重组伪狂犬病毒的制备方法和应用

权利要求书

1.一种Cre和Flp依赖的逆向示踪重组伪狂犬病毒的制备方法，包括下述步骤：

1)Cre和Flp依赖表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的质粒构建：采用PCR扩增、酶切重组的方式将SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO.16所示序列顺次插入载体pAAV-nEF Con/Fon hChR2(H134R)-EYFP，获得克隆命名为pleft arm-FDIO-mCherry-DIO-EGFP-CMV-BFP-right arm；

2)Cre和Flp依赖表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的重组病毒的制备：将步骤1)中的克隆转染BHK21细胞后感染伪狂犬病毒Bartha株，收集细胞培养上清，纯化，即得重组伪狂犬病毒PRV527。

2.权利要求1所述的制备方法制得的重组伪狂犬病毒。

3.权利要求2所述的重组伪狂犬病毒和辅助病毒在研究药物抑制伪狂犬病毒作用机制中的应用。

4.权利要求2所述的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒疫苗的开发中的应用。

5.权利要求2所述的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒感染的动物模型的建立中的应用。

6.权利要求2所述的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒复制和致病机制的分析中的应用。

7.权利要求2所述的重组伪狂犬病毒在对哺乳动物的脑神经环路进行示踪中的应用。