[发明专利]一种苗族药材青荚叶的快速繁殖方法

说明书

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种苗族药材青荚叶的快速繁殖方法，包括依次进行的如下步骤：获取青荚叶的外植体、不定芽诱导、不定芽的继代培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；所述的不定芽诱导的诱导培养基包括：MS培养基、0.5～1.0mg/L ZT、0.1～0.3mg/L NAA、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8，本发明的方法的苗族药材青荚叶试管苗移栽成活率达到91％以上。

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及苗族药材青荚叶的快速繁殖方法。

背景技术

苗族药材枪墙叶即青荚叶(Helwingia japonica.japonica)，为山茱萸科青荚叶属落叶灌木。青荚叶属有青荚叶、中华青荚叶、西藏青荚叶、浙江青荚叶和峨眉青荚叶等5种，主要分布于亚洲东部的尼泊尔、锡金、不丹、印度北部、缅甸北部、越南北部、中国和日本等国。我国5种均产，主要分布于陕西、河南、长江流域及华南地区等海拔1500米以上的原始森林中。由于青荚叶雌花无梗，花和果实在叶面中央的主脉上生长，又被称为叶上花或叶上果。其根茎叶入药，具有舒筋活络、调经、止咳等功效，苗族民间常以叶上花、无花果、月季花搭配治疗月经不调,以叶上花、矮陀陀、土三七搭配治疗劳伤,单独使用青荚叶来治疗年久咳喘。此外，青荚叶为落叶小灌木，雌雄异株，雌株的花和雄株的果均具有很强的直观性，这种奇特的现象总能吸引路人的驻足观赏。景观配置上，种植在阴湿肥沃处，如配植紫丁香、垂丝海棠树下，或种植于水塘、墙边或台阶前，或盆栽于室内，均有良好的观赏效果。

目前，青荚叶尚处于引种阶段，少量栽培于贵州、广西苗族地区。青荚叶主要采用种子繁殖，但由于其种子常被鸟类采食，难以获得足够用于繁殖的种子。因此，为了解决青荚叶规模化种植中其种苗缺乏的问题，有必要建立青荚叶的组织培养快繁体系，本发明选择青荚叶带节茎段为外植体，经不定芽诱导培养、继代培养、生根培养以及移栽等步骤，实现了苗族药材青荚叶的快速繁殖。本发明具成本低、工艺简单、成苗快等特点，可直接用于青荚叶种苗的工厂化生产，对于青荚叶的遗传改良和种质资源保护具有重要的现实意义。

目前，国内外尚未有青荚叶组织培养技术的报道，也未有青荚叶组培快繁专利的申请。

发明内容

本发明的目的是提供一种苗族药材青荚叶的快速繁殖方法，本发明选择青荚叶带节茎段为外植体，经不定芽诱导培养、继代培养、生根培养以及移栽等步骤，实现了苗族药材青荚叶的快速繁殖，从而实现了本发明的目的。

本发明提供的技术方案为：一种苗族药材青荚叶的快速繁殖方法，包括依次进行的如下步骤：获取青荚叶的外植体、不定芽诱导、不定芽的继代培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；

所述的不定芽诱导的诱导培养基包括：MS培养基、0.5～1.0mg/L ZT、0.1～0.3mg/L NAA、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

在上述的苗族药材青荚叶的快速繁殖方法中，所述的不定芽诱导的方法为：将青荚叶的外植体经清洗消毒处理后切成1.0～1.5cm左右的带节茎段并接种到诱导培养基中，在25～28℃进行全暗培养25～30天即可诱导形成不定芽。

在上述的苗族药材青荚叶的快速繁殖方法中，不定芽的继代培养所用的继代培养基包括：MS培养基、0.5～1.0mg/L 6-BA、0.1～0.5mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

在上述的苗族药材青荚叶的快速繁殖方法中，所述的不定芽的继代培养的方法具体为：将经过不定芽诱导得到的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养25～30天即可实现不定芽的继代。