[发明专利]哈蟆油真伪鉴别的方法及专用引物

权利要求书

1.用于哈蟆油真伪鉴别的引物对，由引物1和引物2组成；

所述引物1为序列1所示的单链DNA分子；

所述引物2为序列2所示的单链DNA分子。

2.一种用于鉴定或辅助哈蟆油的PCR试剂，包括权利要求1所述的引物对、DNA 聚合酶和dNTP。

3.根据权利要求2所述的PCR试剂，其特征在于：

所述引物对中每条引物在所述PCR试剂中的浓度均为2 nmol/L ；

和/或，各个dNTP在所述PCR试剂中的浓度具体为2.5 nmol/L ；

和/或，所述DNA 聚合酶具体为SpeedStar HS Taq DNA 聚合酶或Phanta Max Super-Fidelity DNA 聚合酶。

4.一种鉴定或辅助鉴定哈蟆油的试剂盒，包括权利要求1所述的引物或权利要求2或3所述的PCR试剂。

5.权利要求1所述的引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下（A1）-（A5）中任一种中的应用：

（A1）鉴定或辅助鉴定哈蟆油；

（A2）鉴别或辅助鉴别哈蟆油；

（A3）鉴别或辅助鉴别哈蟆油及其伪品；

（A4）鉴定或辅助鉴定待测样品是否为哈蟆油；

（A5）鉴定或辅助鉴定待测样品是哈蟆油还是其伪品。

6.一种检测或辅助检测待测样品是否为哈蟆油的方法，包括如下步骤：检测待测样品中是否含有DNA片段A；如果含有，则待测样品为或候选为哈蟆油；如果不含有，则待测样品不为或候选不为哈蟆油；

所述DNA片段A的核苷酸序列为序列5；

所述检测待测样品中是否含有DNA片段A的方法包括如下步骤：

1）用权利要求1或2所述的引物对待测样品进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2）用如下a或b检测所述PCR扩增产物：

a、向所述PCR扩增产物中加入DNA荧光染料，紫外检测，若PCR扩增产物有荧光，则待测样品含有所述DNA片段A，若PCR扩增产物无荧光，则待测样品不含有所述DNA片段A；

b、检测所述PCR扩增产物大小，若大小为520-530 bp，则所述待测样品含有所述DNA片段A，若大小不为520-530bp，则所述待测样品不含有所述DNA片段A。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

所述PCR扩增的模板为待测样品的基因组DNA；

所述PCR扩增条件为90 ℃ 3s，62℃ 20 s，32 个循环。