[发明专利]一种冻干保护剂及其制备方法、使用方法有效
| 申请号： | 201611036699.2 | 申请日： | 2016-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN106754374B | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 鲁吉珂;林松洋;刘鑫;康巧珍;郝利民;鲁来政 | 申请（专利权）人： | 郑州大学 |
| 主分类号： | C12N1/04 | 分类号： | C12N1/04;C12N1/20;C12R1/46;C12R1/25;C12R1/245;C12R1/225;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 王加贵 |
| 地址： | 450000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冻干保护剂 制备 预处理 乳酸菌菌种 乳酸菌细胞 低温冷冻 细胞破碎 制备工艺 实施性 冷冻 | ||
1.一种冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将培养至对数期的菌体进行梯度降温处理；
将菌体进行洗涤离心处理，收集菌体；
将菌体破碎；
所述菌体为乳酸乳球菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种中的任意一种；
离心收集上清液，并进行冻干处理，获得冷冻保护剂。
2.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，
所述的梯度降温处理包括在31℃-0、0- -45℃、-45- -80℃，每个温度梯度下冷冻处理0.5-5h。
3.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，
所述将菌体进行洗涤离心处理，收集菌体包括：
将菌体在转速为5000rpm，离心时间为10-20min，温度为0-6℃下进行离心；用缓冲液洗涤，缓冲液为摩尔浓度0.05M的pH为6.63的Tris-HCl溶液，其中，菌体的质量和缓冲液的体积配比为1g：(30-50)ml。
4.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，
所述将菌体破碎包括：
采用超声破碎，破碎条件为:功率为300-350w，超声5s，停止5s，共超声30min-60min。
5.如权利要求1所述的冷冻保护剂的制备方法，其特征在于，
所述离心收集上清液，并进行冻干处理，获得冷冻保护剂包括：
离心条件为6000-20000rpm，时间为10-20min，温度为4℃。
6.一种冻干保护剂，其特征在于，是采用如权利要求1-5任一所述的冷冻保护剂的制备方法制备的。
7.如权利要求6所述的一种冻干保护剂的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：用缓冲液将冻干保护剂稀释，至蛋白浓度为5-10μg/μl，获得冻干保护剂溶液；将冻干保护剂溶液与菌体发酵液进行混合冻干，其中，冻干保护剂溶液与菌体发酵液的体积比为1:(4-10)。
8.如权利要求7所述的冻干保护剂的使用方法，其特征在于，所述的菌体发酵液为对数期的菌体发酵液。
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