[发明专利]蛋白激酶抑制剂在从非神经细胞制备神经细胞中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及蛋白激酶抑制剂在从非神经细胞制备神经细胞中的用途，更具体地，涉及蛋白激酶抑制剂在从非神经细胞制备神经细胞中的用途、制备神经细胞的方法、用于制备神经细胞的试剂盒、试剂盒在从非神经细胞制备神经细胞中的用途、神经细胞或其衍生物、神经细胞或其衍生物在制备药物中的用途。 

背景技术

中枢神经系统紊乱(CNS)疾病，包括老年痴呆症(Alzheimer’s Disease，AD)、帕金森病(Parkinsin’s Disease，PD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS)、多发性硬化症(Multiple Sclerosis，MS)和脑白质营养不良(Leukodystrophies)等，在全世界范围内，CNS疾病影响数百万人的健康，而目前大部分CNS疾病仍没有有效的治疗方法。在非人灵长类动物和啮齿动物中，神经细胞移植已经被证明是一种非常有前景的治疗CNS疾病的方法。然而，细胞治疗要求高质量且数量庞大的神经细胞，但神经细胞的来源有限。在过去的二十年，已有多种方法用于在体外制备神经细胞，包括从人胚胎干细胞(hESC)、诱导多能干细胞(hiPSC)和体细胞转化获得神经细胞。但目前将制备获得的神经细胞用于细胞移植仍存在多种限制，例如，从hESC转化获得的神经细胞由于存在少量未转化的hESC而存在致瘤危险，同时由于异体移植而存在免疫排斥问题，hiPSC虽然可以从特定患者获得而减轻免疫排斥问题，但其和hESC一样，存在安全性问题。 

最近，从体细胞直接转化获得神经细胞吸引了众多研究者的注意。在2010年，Wernig研究组首先提出采用转录因子可以将纤维细胞直接转化为神经细胞。随后研究者证实了多种多样的神经因子和微RNAs可以用于诱导纤维细胞-神经细胞转化。最新的报道表明过表达转录因子可以诱导老鼠纤维细胞重编程为能产生髓鞘的少突胶质前体细胞(OPCs)。由此，在疾病模型和细胞治疗的发展中，直接纤维细胞-OPCs转化成为了一种可替换hESC/hiPSC技术的方法。直接纤维细胞-OPCs转化具有以下优点：不需要制备、扩增、分化多能细胞的时间，诱导获得的有丝分裂后期的神经细胞具有较低的致瘤性和畸胎瘤形成可能。因而，直接从纤维细胞转化获得的神经细胞适合用于自体移植。然而，目前报道的从纤维细胞直接转化神经细胞的方法中均需要使用转录因子，这将使得转化周期较长，且安全性较差。 

因而，目前关于体外制备神经细胞的方法仍有待改善。 

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种采用蛋白激酶抑制剂有效制备获得安全性高、适于自体移植的神经细胞的手段。 

在本发明的第一方面，本发明提供了蛋白激酶抑制剂在从非神经细胞制备神经细胞中的用途。发明人惊奇地发现，在存在蛋白激酶抑制剂时，不需要使用转录因子，非神经细胞即能够有效转化为神经细胞。 

根据本发明的实施例，所述蛋白激酶抑制剂为选自下列的至少一种：ROCK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、FAK抑制剂以及免疫抑制剂。由此，能够有效诱导非神经细胞转化为神经细胞。 

根据本发明的实施例，所述蛋白激酶抑制剂为选自下列的至少一种：ROCK抑制剂Y27632、AKT/mTOR抑制剂Palomid 529、PI3K抑制剂LY294002、FAK抑制剂PF562271以及免疫抑制剂雷帕霉素。由此，能够有效诱导非神经细胞转化为神经细胞，且转化率较高。 

根据本发明的实施例，所述神经细胞为选自少突胶质前体细胞、成熟少突胶质细胞、神经元细胞、神经胶质细胞的至少一种。由此，制备获得的神经细胞能够有效用于自体移植，治疗中枢神经紊乱疾病以及脊髓损伤，且安全性高，不存在免疫排斥反应。 

根据本发明的实施例，所述非神经细胞为人类细胞，所述人类细胞为选自成纤维细胞、上皮细胞、成人细胞和新生儿细胞的至少一种。由此，在存在蛋白激酶抑制剂时，能够快速有效地转化为神经细胞。 

在本发明的第二方面，本发明提供了一种制备神经细胞的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：在存在蛋白激酶抑制剂时，对非神经细胞进行培养。发明人发现，利用本发明的该方法，不需要使用转录因子，即能够快速有效地制备获得神经细胞，且获得的神经细胞适合用于自体移植，治疗中枢神经紊乱疾病以及脊髓损伤，同时安全性高，不存在免疫排斥反应。