[发明专利]miR-15a作为主动脉夹层临床筛查分子标记物的应用及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域。

背景技术

主动脉夹层是指主动脉内高速高压血流通过主动脉壁上的内膜撕裂口进入中膜层或中外膜交界处，从而形成主动脉真假两腔，并沿主动脉长轴方向扩展，导致主动脉破裂致患者死亡或重要脏器（如：心脏、大脑、肾脏、肠道等）急性缺血引起严重并发症，病情凶险，是累及主动脉最严重的疾病之一；按病程可分为急性主动脉夹层（acute aortic dissection，AAD）、亚急性主动脉夹层（subacute aortic dissection，SAD）和慢性主动脉夹层。我们在临床实践中发现，很多主动脉夹层患者在获得手术治疗前甚至是明确诊断前即因病变主动脉破裂而死亡。有调查研究显示，未经治疗的Stanford A型急性主动脉夹层患者发病初期的死亡率高达1%～2%/h。经合理治疗的患者生存率会大幅提高，尤其是经手术治疗的患者，将会在短期内实现生存率从高死亡风险提高至大于70%。但是，在临床工作中，针对剧烈胸痛的患者常规进行的检查是心电图和胸部X线透视，这些检查对急性主动脉夹层的诊断都缺乏敏感度和特异性。从而主动脉夹层的患者往往不能得到及时有效的诊治，加之有部分亚急性主动脉夹层患者并未表现出主动脉夹层的典型临床表现，导致主动脉夹层这一被医疗工作者发现并研究200多年的疾病（于1761年由Morgagni第一次报道）的临床误诊率仍高达39%，部分患者只有在尸检时才发现罹患了主动脉夹层。尤其是在Stanford A型急性主动脉夹层累及冠脉时，误诊为冠心病、急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）的可能性非常大；患者往往被施予抗凝、抗血小板、甚至是溶栓治疗，导致病情恶性进展。因此，及时明确诊断并采取合理的治疗是救治主动脉夹层患者的关键之一。

目前，主动脉夹层的诊断主要依赖于影像学检查，例如：电子计算机X线断层血管成像、经食道多普勒超声或者核磁共振血管成像，这些检查对急性主动脉夹层具有非常高的敏感度和特异性。但是，这些检查是在首诊医生认为该患者有罹患主动脉夹层可能的情况下进行的，且需要接诊医生首先排除具有相似临床表现的、发病率更高的急性冠脉综合征、肺梗死等疾病；加之这些检查的操作和等待过程需要大量时间，常会使患者丧失珍贵的早期诊疗时机。因此，寻找主动脉夹层临床适用的早期诊断生物标记物是目前亟待解决的重要问题之一，同时对疾病病情发展转归的监测及预后具有重要意义。学术界为寻找主动脉夹层的生物标记物进行了大量研究，发现了诸如：C反应蛋白、D-二聚体、平滑肌肌球蛋白重链、钙调理蛋白等可能与急性主动脉夹层的发生有关联的一系列生物标记物，但由于缺乏特异性、半衰期短或受到假腔血栓化的局限等因素均未能在急性主动脉夹层的临床诊治中得到广泛应用。对此，Ranasinghe等提出了理想的早期诊断指标应具备的一般特点：灵敏度高、特异性强、能够反映疾病的病程转归、快捷、易用、价格低廉、具有良好的临床应用前景和广泛的商业供应商；为主动脉夹层生物标记物的研究提供了理论标准。

在临床诊疗过程中，许多实验室检查项目以其迅速、能够在床边完成、并且对疾病具有较高的敏感度和特异性等特点，得到了广泛应用。近年来科学的重大发现微小RNA（mircoRNA，miRNA）是一类在人类和动物广泛存在并高度保守的小分子非编码RNA；miRNA在心血管组织细胞发育与分化及结构形成异常过程中扮演了极为重要的角色，本课题组前期针对主动脉夹层组和健康组（遗体捐献者）主动脉标本中miRNA进行检测分析，得到夹层主动脉中膜显著改变的miRNA表达谱，同时我们还发现了主动脉夹层中下调的miR-22与HSP27和EC-SOD相关(J vasc surg.2011;53:1341-9)。新近研究表明，miRNA因具有组织特异性及高度保守的特性，使其具有作为疾病生物标记物的可能。例如：Ai等通过急性心肌梗死患者与对照组比较，结合小鼠模型中miR-1的过表达，证实在急性心肌梗死患者循环血中miR-1水平显著增高，发病两周后恢复到基础水平的变化趋势；荆清教授等报道了急性心肌梗死患者相对健康人循环血中显著增高的miR-208a，其血浆水平随患者病情转归而变化，并且外周血中miR-208a早于心肌肌钙蛋白出现的特点，提示miR-208a可能是急性心肌梗死一个更敏感的早期标志物。

发明内容

本发明是基于上述背景技术，为了解决目前存在的问题而进行的，目的在于提供灵敏度高、特异性强、能够反映疾病的病程转归、快捷、易用、价格低廉、具有良好的临床应用前景和广泛的商业供应商的主动脉夹层分子标记以及主动脉夹层临床筛查试剂盒。为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案。