[发明专利]一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用。

背景技术

癌胚抗原（CEA）是一种酸性蛋白，最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。癌旁正常粘膜CEA含量很少或为阴性。胃癌的CEA阳性率85.58%。其中粘液腺癌及印戒细胞癌（粘液细胞癌）为100%。电镜下见CEA同时分布于癌细胞膜，及癌细胞内胞质内的蛋白合成及转运的细胞器（如核膜、内质网、高尔基器及其分泌小泡）中。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15%～53%的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50－70%。良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬化变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20μg/L，CEA超过20ng/ml时往往提示有消化道肿瘤。所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。

本项目主要应用与在食管癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胃转移癌等恶性肿瘤相关蛋白领域创立抗体芯片检测技术平台，自主研发48种恶性肿瘤标志物抗体芯片检测试剂盒（抗体芯片）完全是由中国人自主开发，应用这一芯片，可通过多种方式、多种渠道、多层面检测恶性肿瘤标志物的效价和含量，将检测灵敏度由ug提高到ng级，从而达到更准确、更全面的效果，其检测结果可指导临床治疗。48种恶性肿瘤标志物抗体芯片检测试剂盒（抗体芯片）对促进我国生物高技术前沿领域的发展具有重大鼓舞作用，对提升我国生物芯片技术、产品和市场的国际竞争力具有重大意义，此方法完全符合分子免疫学原理。目前国外几乎所有的主要制药公司都不同程度地采用了生物芯片技术来寻找药物靶标，查检药物的毒性或副作用及进行药物产品的定量和定性。用芯片技术进行大规模的药物筛选可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间，从而带动创新药物的研究和开发。

发明内容

本发明的目的在于提供一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用。

本发明的整体技术构思是：利用自主设计合成的癌胚抗原（CEA）多肽（序列为TQQAT PGPAYSGREI）经免疫动物、细胞融合、亚克隆及酶联免疫吸附实验进行特异性筛选技术，获得高效价、高特异性抗人癌胚抗原单克隆抗体，由于此单抗效价高、特异性好，与另外47种与肿瘤相关的单克隆抗体点制的抗体芯片，结合CY3标记的补体C3抗体与被检产品建立了完整的检测系统，用于检测48种恶性肿瘤标志物蛋白质含量。此抗体芯片具有灵敏度高,特异性好、操作简单、高通量等优点,可用于临床和体检血清的监测和质控。

一种癌胚抗原的单克隆抗体，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；或其重链可变区由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO.1的氨基酸序列至少有95%的一致性，轻链可变区由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO.2的氨基酸序列至少有95%的一致性且所述单克隆抗体具有特异性结合癌胚抗原的特性。

作为优选，所述单克隆抗体包括单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。

本发明所述“抗体”应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP．A-0120694和EP．A．0125023中描述。