[发明专利]利西拉来的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及利西拉来的纯化方法。

背景技术

糖尿病是一种全球性的高发病，其主要分为Ⅰ型和Ⅱ型，后者占糖尿病患者总数的90%以上。

通过胰高血糖素样肽1（GLP-1）受体拮抗剂利西拉来（Lixisenatide）联合基础胰岛素来治疗Ⅱ型糖尿病患者，可显著改善其血糖控制，并提高其餐后血糖（PPG）的控制。

利西拉来是由43个氨基酸残基组成的长链多肽，而且肽序列中有如Ser、His、Pro等在多肽固相化学合成过程中易异构化的氨基酸而导致利西拉来粗肽中含有很多异构体杂质。因此利西拉来的分离纯化成为该药品制备工艺中的技术难点，尤其是大规模制备的利西拉来的纯化已成为制约其产业化的瓶颈之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种利西拉来的纯化方法，尤其是通过多肽固相化学合成方法而大规模制备的利西拉来的纯化方法。

本发明的利西拉来的纯化方法包括以下步骤：

步骤1：采用高效液相色谱（HPLC）方法对利西拉来粗肽进行纯化，所述HPLC方法以苯基硅烷键合硅胶为固定相，以D-酒石酸盐的甲醇/磷酸盐缓冲溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱；

步骤2：采用HPLC方法对步骤1所得到的馏分进行转盐纯化，所述HPLC方法以烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱；

步骤3：收集溶液冻干。

本发明通过采用以苯基硅烷键合硅胶为固定相，在流动相中加入D-酒石酸盐和质子给予体甲醇的HPLC方法纯化，可以一次性将利西拉来粗肽中的异构体杂质和其他难分离杂质很好地分离而去除。然后利用反相HPLC方法转成醋酸盐API，提高了产品的收率和纯度。此外，该纯化方法操作简便，有利于实现规模化制备的利西拉来的纯化。

附图说明

图1实施例1中的利西拉来纯化后的色谱图。

具体实施方式

本发明的利西拉来的纯化方法包括以下步骤：

步骤1：采用HPLC方法对利西拉来粗肽进行纯化，所述HPLC方法以苯基硅烷键合硅胶为固定相，以D-酒石酸盐的甲醇/磷酸盐缓冲溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱；

步骤2：采用HPLC方法对步骤1所得到的馏分进行转盐纯化，所述HPLC方法以烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱；

步骤3：收集溶液冻干。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相中的D-酒石酸盐的摩尔浓度优选为10mM~50mM。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相中的D-酒石酸盐优选为一种或多种选自D-酒石酸钠、D-酒石酸钾、D-酒石酸铵的D-酒石酸盐。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相中的磷酸盐的摩尔浓度优选为20mM~50mM。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相中的磷酸盐优选为一种或多种选自磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸铵或磷酸二氢铵的磷酸盐。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相溶液的pH优选为2.0~4.0。

所述步骤1中的HPLC方法的流动相A相中的甲醇占整个流动相A相的体积比优选为10~20%（v/v）。

所述步骤1中的HPLC方法的梯度按照流动相A相的百分比为(75~85)%A→35min(55~65)%A,]]>根据保留时间可适当调整。

所述步骤2中的HPLC方法的流动相A相中的冰醋酸水溶液的体积百分浓度优选为0.1~0.3%（v/v）。

所述步骤2中的HPLC方法的固定相优选为八烷基硅烷键合硅胶、六烷基硅烷键合硅胶或四烷基硅烷键合硅胶。