[发明专利]一种泡腾片式低分子量胶原蛋白肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及胶原蛋白肽提取及应用领域，更加具体地说，具体涉及一种泡腾片式低分子量胶原蛋白肽及其制备方法。

背景技术

胶原蛋白或称胶原是由动物（从海绵动物到脊椎动物）细胞合成的一种生物高分子化合物，广泛存在于动物骨、腱、软骨和皮肤及其它结缔组织中，约占哺乳动物总蛋白1/3，在骨头与肌腱中约有90%以上，皮肤中约有50%以上的蛋白质为胶原蛋白。而胶原蛋白的水解产物胶原蛋白肽具有抗血压、调节免疫、抗肿瘤、护肤美容等众多功效。蛋白质水解产生的胶原蛋白活性肽主要是以化学法和酶法水解而来，化学法以酸或碱断开蛋白质肽键，由于反应环境较极端，不利于活性的保持，而酶解蛋白质生产活性肽的安全性却很高，能在温和的条件下进行定位水解分裂产生特定的肽，且水解过程易控制，因而近几年报道的活性肽的制备方法均为酶解法。酶的选择是酶解法生产活性肽的关键，而目标活性肽的下游技术则是决定能否将之用于生产的关键。对于化妆品级胶原蛋白肽而言，《皮胶原蛋白的酶法提取及在高附加值领域的应用》、《化妆品级水解蛋白质分子量分布的研究》等相关文献指出分子量低于2KD或1KD左右的胶原蛋白肽可以很好地渗入人体皮肤，达到美容护肤的作用。CN102199649A、CN102154424A、CN102031279A等相关专利以超滤、纳滤设备为基础截获低分子量的胶原蛋白肽，但是从胶原蛋白肽的提取率上说，这种纯化方法有一定的局限性，并且成本较高。目前市面上的胶原蛋白化妆品分子量分布较宽，1KD的胶原肽的比重不高，直接影响胶原化妆品的质量。并且绝大多数化妆品里都含有防腐剂，这增加了安全隐患。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种低分子量胶原蛋白肽的提取方法以及相对应的泡腾片剂型和制备方法。不仅解决现有技术所存在的化妆品中含有人体难以吸收的高分子胶原蛋白的问题，也解决了工业生产中胶原蛋白肽分布范围宽，得率低的问题；同时首创了不含有防腐剂的胶原化妆品新剂型。

本发明的技术目的通过下述技术方案予以实现：

一种低分子量胶原蛋白肽的提取方法，按照下述步骤进行：

步骤1，除去猪皮中非胶原性蛋白质

选取新鲜猪皮（即原料猪皮），清洗，沥干，常温20-25摄氏度的条件下，用0.1mol/l~0.15mol/lNaOH水溶液浸泡，料液比为1:25~1:30(g/ml，即猪皮的质量和NaOH水溶液的体积比)，在100-200转/min下搅拌18h~24h，以除去猪皮里非胶原性蛋白质，然后过滤，得猪皮备用。

步骤2，脱除猪皮中的脂肪

按料液比为1:25~1:30(g/ml，即步骤1处理后的猪皮质量和水的体积比)的比例取水，然后加入占原料猪皮质量2%~4%的脂肪酶，调整温度和体系的pH值以使加入的脂肪酶活性达到最大，在100-200转/min的搅拌条件下脱除脂肪。例如使用脂肪酶（天津市诺奥科技发展有限公司，型号IF-G-NL2）时，使用Na₂CO₃粉末调节pH值为9～9.3，35℃恒温低速100-200转/min搅拌8h~10h。

步骤3，溶胶

将脱去脂肪的猪皮置于水中，料液比1:15~1:20(g/ml，即步骤2处理后的猪皮质量和水的体积比),80℃的条件下恒温加热，低速100-200转/min搅拌4h~6h，得到猪皮和水溶性胶原的混合物。

步骤4，制备胰蛋白酶酶解蛋白肽溶液

将上一步的猪皮和水溶性胶原的混合物降温，同时调节混合物溶液的pH值以使加入的胰蛋白酶活性达到最大，加入胰蛋白酶，E/[S]=1000~2500u/g（即每g原料猪皮对应的胰蛋白酶活性为1000-2500u）,低速100-200转/min搅拌18h-24h。然后将酶解后的蛋白肽液灭酶活，离心除去不溶物，得到胰蛋白酶酶解蛋白肽液。利用使用胰蛋白酶（天津市诺奥科技发展有限公司，型号YDB-G-035）时，将上一步的猪皮和水溶性胶原的混合物降温至50℃,保持50℃恒温。调节混合物溶液的pH=7，加入胰蛋白酶，将酶解后的蛋白肽液置于95℃的环境下5-10min，以灭酶活。

步骤5，蛋白肽液脱色

配置2wt%~4wt%的硅藻土的水溶液，抽滤，使滤纸表面形成一层均匀的硅藻土层，以此为过滤介质，对蛋白肽液抽滤。抽滤后的蛋白肽液进入树脂柱进行分离，得到澄清透明的胶原蛋白肽液。在使用D296R树脂（南开大学化工厂，全称为大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂）时，可控制流速为以2ml/min~6ml/min的流速进入D296R型树脂柱。