[发明专利]一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法及其应用。

背景技术

全球癌症发病率持续升高，死亡率也逐年攀升。除了癌症本身，放化疗副作用是导致癌症死亡率逐年攀升的重要原因。化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也将正常细胞一同杀灭。故化疗引起的正常细胞损伤已经成为放化综合治疗实施的障碍，甚至会延长治疗周期，影响治疗效果，缩短肿瘤病人的寿命。

乌骨鸡是我国特有珍禽，被列为国家级珍贵品种资源。乌骨鸡不仅是一种营养丰富的滋补食品，还是一种特有的药用鸡种，具有食用安全性，被历代医家延用。

乌骨鸡肽的制备方法也有报道。如授权公告号为CN 100569794C 的《一种乌骨鸡活性肽的制备方法》以乌骨鸡为原料，通过酶解、初滤、精滤、超滤或超滤和纳滤，制得分子量小于6000 Da的乌骨鸡多肽。其制备乌骨鸡多肽的步骤繁琐，能耗大。授权公告号为CN 1168394C的《一种乌鸡营养成分的提取工艺》将乌鸡去毛及内脏后，加3~4倍量水煮沸2小时，降温至50~60 ℃，调pH值5.5~7.0，加木瓜蛋白酶对乌鸡肉糜酶解，酶解时间为5 小时，而后灭酶，去渣，虫蜡去脂，活性炭脱苦，过滤，加防腐剂，得营养液。该方法将乌鸡加水煮沸后，以乌鸡肉糜为酶解底物，底物复杂多样，大大降低了酶解效率。且步骤繁琐，生产周期长，不适合工业化生产。以上传统酶解方法均是对乌骨鸡肉糜实施酶解，得率较低，因此，研究生产流程简单，产物得率高、活性高的适合工业化生产的乌骨鸡肽的制备方法具有重要经济意义。

目前，已有文献报道乌骨鸡肽具有某些生理功能，但其在化疗减毒增效方面的作用还未见报道。临床上也未见乌骨鸡肽用于肿瘤化疗辅助治疗的报道。

发明内容

    针对上述现有情况，本发明提供一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法，由此方法得到的乌骨鸡肽，以及该乌骨鸡肽在化疗减毒增效中的应用。

本发明的技术方案为：以乌骨鸡为原料，采用蒸煮的方法提取乌骨鸡可溶性蛋白，对可溶性蛋白实施控制酶解，酶解液浓缩、干燥处理，得乌骨鸡肽。其具体步骤为：(1)乌骨鸡可溶性蛋白提取：乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取乌骨鸡肉泥，蒸煮处理。蒸煮后，将可溶性蛋白与剩余固形物分离，除油，得乌骨鸡可溶性蛋白。(2)控制酶解：对分离后的可溶性蛋白实施酶解。酶解后升温灭酶，得酶解液。(3)干燥：酶解液浓缩、干燥，得乌骨鸡肽。

步骤(1)中，乌骨鸡可溶性蛋白的提取可以是如下两种方法，但不限于此：

第一种，将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:1~1:5的比例加水，置于高压锅内，在100 ℃~135 ℃温度下，高压20 min~120 min。分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用。按此方法共高压提取1~4次。

第二种，将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:1~1:5的比例加水，于普通锅中，在80 ℃~100℃温度下，水煮20 min~120 min。分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用。按此方法共水煮提取1~4次。

步骤(1)中，可以采用真空抽滤、板框过滤分离可溶性蛋白与剩余固形物，采用管式离心除油，得可溶性蛋白，但不限于此。

步骤(2)采用复合酶解的方式，具体地采用木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶两两组合的复合酶解方式。加酶量为可溶性蛋白质量的0.5 ‰~5 ‰，两种酶的质量份数比为10%:90%~90%:10%，酶解温度为40 ℃~65 ℃，酶解时间为1~8 h。酶解后升温灭酶，得酶解液。

步骤(3)干燥可以采用真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，浓缩可以采用多级闪蒸，但不限于此。

由步骤(1)制备乌骨鸡可溶性蛋白，其平均提取率为10.45%，远远高于传统酶解方法制备乌骨鸡肽8%左右的提取率。对比活性试验证实，本发明方法制备的乌骨鸡肽是确定能够起到化疗减毒增效作用的。具体表现为能够有效减轻化疗药物—5-氟尿嘧啶对人成纤维细胞的损伤、抑制多种癌细胞的增殖、协同5-氟尿嘧啶抑制多种癌细胞的增殖。传统酶解方法制得的乌骨鸡肽以及可溶性蛋白提取剩余固形物酶解产物在对比活性试验中没有显示出化疗减毒增效作用。