[发明专利]一种体外诱导人脐带间充质干细胞高表达Nurr1基因的方法

权利要求书

1.一种体外诱导间充质干细胞高表达Nurr1基因的方法，其特征是在添加了维甲酸（RA）、环化腺核苷一磷酸（CAMP）和Sonic Hedgehog（SHH）的基础培养基中诱导间充质干细胞高表达Nurr1基因。

2.根据权利要求1的方法，所述基础培养基为DMEM/F-12。

3.根据权利要求1的方法，所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，所述基础培养基中添加的RA为10^-6 M～10^-4 M 、CAMP为0.5 mM～2 mM和SHH为200 ng/mL～750 ng/mL。

5.根据权利要求4的方法，所述RA为10^-5M，CAMP为1 mM和SHH为500 ng/mL。

6.根据权利要求5的方法，其包含以下步骤：

（1）取2～8代人脐带间充质干细胞，当细胞贴壁生长至80%～90%融合时，吸除T₇₅培养瓶内原有培养液，取5～10 mL 0.01M PBS轻轻加入T₇₅培养瓶内洗涤，弃去洗液；

（2）加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.01%(w/v) EDTA消化液1.0 mL，浸漫覆盖瓶底，倒置显微镜下观察见细胞呈圆形漂起时，加入1.0 mL胎牛血清中止胰蛋白酶消化；

（3）加入20 mL 0.01 M PBS反复吹打冲洗，在室温下1000 转/分离心5分钟；弃去上清液后，加入10 mL DMEM/F-12重悬细胞，在T₂₅培养瓶中接种5×10⁵个人脐带间充质干细胞；

（4）培养体系为含5% 胎牛血清，100 U/mL青霉素，100μg/mL链霉素的DMEM/F-12完全培养液，添加了10^-5 M RA、1 mM CAMP和500 ng/mL SHH，总体积为5 mL/瓶，置37 ?C，5%二氧化碳培养箱中培养2～4天。