[发明专利]Th1细胞因子免疫调节多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学中的多肽技术，尤其是涉及一种来源于天然TLR2激动剂HP-NAP的Th1细胞因子免疫调节多肽，本发明还涉及该多肽在开发Th1细胞因子免疫调节功能相关药物中的应用。

背景技术

人体免疫系统是机体防止病原体感染、清除肿瘤细胞和维持自身健康的重要防御体系，而CD4⁺T辅助性淋巴细胞是执行这一功能的重要环节。1986年Mosmann等在研究小鼠CD4⁺Th时发现了两种不同类型的细胞因子产生克隆；Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子；而Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10等细胞因子。Th1细胞因子可以增强杀伤性细胞的细胞毒作用，介导免疫应答，与机体抗肿瘤抗病毒有关；Th2细胞因子促进抗体产生，增强体液免疫，与移植物耐受、抑制自身免疫疾病相关。

HP-NAP能上调中性白细胞及单核细胞表面β2整联素的表达，促进中性白细胞及单核细胞与血管内皮细胞的黏附及穿过内皮细胞向感染部位转移聚集。HP-NAP一旦从菌体中释放出来，还可以穿过胃上皮细胞到达黏膜下层并激活巨噬细胞，巨噬细胞释放的IL-6进一步趋化和激活中性白细胞及单核细胞。2010年，Andrea Cappon等研究证实HP-NAP可以通过促进机体释放一些内源性因子（IL-1β等）延长单核细胞的寿命，并且可以通过单核细胞依赖的方式延长中性粒细胞的寿命。2006年Amedeo等报道HP-NAP是一种TLR2（Toll-like receptor 2）激动剂，能够诱导人中性粒细胞和单核细胞产生IL-12和IL-23等细胞因子，使宿主抗原特异性CD4+T细胞由Th2向Th1免疫反应转变。因此HP-NAP可能成为逆转Th1/Th2漂移，增强Th1反应的免疫调节效应分子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于天然TLR2激动剂HP-NAP的Th1细胞因子免疫调节多肽，本发明另一目的在于提供该多肽在开发Th1细胞因子免疫调节功能相关药物中的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的Th1细胞因子免疫调节多肽为16肽，其氨基酸序列为：

Glu-Lys-Glu-Phe-Lys-Glu-Leu-Ser-Asn-Thr-Ala-Glu-Lys-Glu-Gly-Asp。

    本发明的Th1细胞因子免疫调节多肽在制备Th1细胞因子免疫调节剂中的应用。

所述免疫调节剂为恶性肿瘤、哮喘等多肽类免疫调节剂。

本发明的优点在于采用免疫信息学手段，预测天然TLR2激动剂HP-NAP最小功能结构域，采用标准的Fmoc方案进行合成，经HPLC/MS鉴定后，用体外细胞模型验证其对Th1细胞因子免疫调节功能。鉴定出的Th1细胞因子免疫调节多肽序列未见文献与专利报道，为基于Th1细胞因子调节为机理的免疫调节药物研发提供了制备与筛选技术。

附图说明

图1为本发明多肽的质谱分析图；

图2为RT-PCR鉴定本发明多肽napP102刺激PBMCs后IFN-γ表达结果。

图3为RT-PCR鉴定本发明多肽napP102刺激PBMCs后IL-4表达结果。

图4为本发明多肽napP102与MAGE-A3共同作用后的杀伤效果。

具体实施方式

本发明所述的Th1细胞因子免疫调节多肽为16肽，记为napP102，依据天然TLR2激动剂HP-NAP的第 102–117位的氨基酸序列进行Fmoc固相合成，HPLC分离纯化,MS进行鉴定，其氨基酸序列为：

Glu-Lys-Glu-Phe-Lys-Glu-Leu-Ser-Asn-Thr-Ala-Glu-Lys-Glu-Gly-Asp；分子量为1853.958。

本发明的Th1细胞因子免疫调节多肽在制备Th1细胞因子免疫调节剂（如恶性肿瘤、哮喘等多肽类免疫调节剂）中的应用。

本发明主要采用免疫信息学手段，运用SYFPEITHI、IEDB、NetMHC2.2数据库对HP-NAP的功能结构域进行预测分析，设计HP-NAP多肽序列。Kolaskar和Tongaonkar方法进行评价，筛选获得多肽序列采用标准的Fmoc方案进行合成，经HPLC纯化后，质谱鉴定。肽质谱鉴定图见图1。