[发明专利]接骨草饲养茶尺蠖，及用其扩繁EcobNPV的方法

权利要求书

1.接骨草饲养茶尺蠖的方法，其特征在于该方法依次包括以下步骤：

第一步：先采集健康茶尺蠖（Ectropis oblique Warren）的蛹，再置于消毒后的养虫容器内，并在室温下饲养至成虫羽化；

第二步：待上述虫蛹羽化后，先在养虫容器内放入10%蔗糖溶液供成虫补充营养，再用高密纱布覆盖养虫容器供交配后的雌虫在其表面产卵；

第三步：始见卵孵出幼虫后，开始用接骨草（Sambucus chinensis）喂养茶尺蠖幼虫，先将接骨草置于养虫容器周围以供孵出的幼虫取食，当接骨草上的接虫量达到一定数目要求后，再将接骨草置于养虫容器内部供孵出的幼虫取食，在整个幼虫饲养过程中，根据接骨草的新鲜程度和被取食程度，更换和添加接骨草3–4次，饲养直至幼虫化蛹为止。

2.根据权利要求1所述的用接骨草饲养茶尺蠖的方法，其特征在于：所述第一步中每个养虫容器内承装虫蛹400–500头。

3.根据权利要求1所述的用接骨草饲养茶尺蠖的方法，其特征在于：所述第三步中，先将接骨草置于养虫容器周围以供孵出的幼虫取食，当接骨草上的接虫量达到一定数目要求后，再将接骨草置于养虫容器内部供孵出的幼虫取食的操作步骤为：先用细口瓶水培接骨草，并将细口瓶置于养虫容器周围，以供孵出的幼虫取食细口瓶中水培的接骨草，当每个细口瓶中接骨草的接虫量达到80–120头时，再将细口瓶及瓶中水培的接骨草一并转入养虫容器中，每个养虫容器承装4瓶接骨草，共饲养龄期一致的幼虫300–500头，且在养虫容器上覆盖双层高密纱布以防止幼虫逃逸。

4.根据权利要求3所述的用接骨草饲养茶尺蠖的方法，其特征在于：所述细口瓶中水培的接骨草的原料使用状态为：当接骨草长至60cm以上，先用枝剪剪取该植株顶部25–30cm长嫩梢，再选取8–10根长度一致嫩梢为一束，然后置于细口瓶内水培。

5.用权利要求1所述的接骨草饲养茶尺蠖的方法扩繁EcobNPV的方法，其特征在于：所述EcobNPV是茶尺蠖核型多角体病毒，全称为Ectropis grisescens nucleopolyhedrovirus ，简称为EcobNPV；所述扩繁EcobNPV的方法依次包括以下步骤：

第一步：先将感染病毒死亡的茶尺蠖虫尸加少量无菌水置组织匀浆器皿中匀浆3min–5min，再取出浆液按1：6加无菌水混匀，然后在500r/min的条件下离心5min以去除细胞组织碎片和沉淀，再取上清液在3500r/min的条件下离心30 min，然后弃去上清液，并用无菌水悬浮沉淀，再重复上述离心操作2–3次以得到最终沉淀，然后将该最终沉淀用无菌水悬浮即可得到茶尺蠖核型多角体病毒的粗提液；

第二步：先将上述得到的茶尺蠖核型多角体病毒的粗提液用无菌水稀释至5×10⁶PIB/ml以得到病毒液，再在4℃下保存备用；

第三步：按上述接骨草饲养茶尺蠖的方法饲养茶尺蠖，在饲养过程中，当茶尺蠖幼虫长至3龄时开始接种病毒，接种病毒采用上述病毒液进行，接毒浓度为5×10⁶PIB/ml，接毒方式为在每个养虫容器内的接骨草上喷洒病毒液50ml，且初次喷毒后的接骨草必须喂养2天以上才能更换；

第四步：接种病毒5天后开始逐日收集染毒死虫，并将收集的虫尸与50%甘油按1:1的比例混合后置－20℃下保存备用，此时即可得到所需的EcobNPV。

6.根据权利要求5所述的用接骨草饲养茶尺蠖的方法扩繁EcobNPV的方法，其特征在于：所述第三步中接种病毒的茶尺蠖3龄幼虫为第1代、第2代、第3代或第6代茶尺蠖的3龄幼虫。

7.根据权利要求6所述的用接骨草饲养茶尺蠖的方法扩繁EcobNPV的方法，其特征在于：所述第三步中接种病毒的茶尺蠖3龄幼虫为第1代茶尺蠖的3龄幼虫。