[发明专利]一种利用PCR-RFLP技术鉴别西花蓟马品系的方法

权利要求书

1.一种利用PCR-RFLP技术鉴别西花蓟马品系的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)提取西花蓟马基因组DNA；

(2)以西花蓟马基因组DNA为模板对其线粒体COI基因进行PCR扩增；

PCR体系中，引物序列如下：

正义引物：5’GGATCACCTGATATAGCATTCCC3’；SEQ ID NO.1

反义引物：5’ACTGTAAATATATGATGAGCTCA3’；SEQ ID NO.2

(3)对步骤(2)制得的PCR产物用限制性内切酶EarI酶切，得酶切产物；

(4)对步骤(3)制得的酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，当PCR产物电泳图谱显示被测样品有两条不同长度的条带时，则该被检测样品为L型西花蓟马；当PCR产物电泳图谱显示被测样品有一条条带时，则为G型西花蓟马。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：

基因组DNA  2μl，20μM引物0.4μl，5U/μl Taq酶0.2μl，10×Taq Buffer 5μl，

10mM dNTP  0.4μl，ddH₂O补至20μl。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件如下：94℃，5min；进行35个循环的94℃50sec，53℃40sec，72℃50sec；72℃延伸7min；4℃，保温。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中EarI酶切反应条件如下：37℃，2hr。