[发明专利]一株链霉菌及其在生产放线菌素中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株链霉菌及其在生产放线菌素中的应用。

背景技术

癌症是一种非常古老的疾病，伴随着整个人类发展的历史，严重威胁着人类的健康与生命。放线菌素能够通过影响核酸合成、诱导细胞分化、诱导细胞凋亡、抑制一些蛋白酶活性及影响细胞周期等方式发挥其抗肿瘤活性。放线菌素还可通过与DNA结合抑制RNA合成而发挥抗菌、抗病毒的作用。

放线菌素D已经成为较为理想的抗肿瘤药物，广泛应用于恶性肿瘤的临床治疗、结合手术治疗和放射治疗，对肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、霍奇金病、绒毛膜癌及睾丸肿瘤的治疗有效，尤其是对儿童肾母细胞瘤有很好的治疗效果，也常与其他药物联合用于肿瘤的治疗与研究。

放线菌素X₂除了更好的抗肿瘤作用外，对病毒性心肌炎最常见的病原体柯萨奇病毒(CVB3)有显著地抑制作用。

上世纪后期人们开始对放线菌素进行深入研究，主要集中于放线菌素的生物学功能和临床药理学研究，目前放线菌素已不仅是临床上重要的抗肿瘤药物，也越来越成为分子生物学和细胞生物学研究的工具。

放线菌素的产生菌已见报道的有近30种，但基本上都是单一成分高产，且在这些产生菌中，放线菌素D的产量最高为野生菌株0.21mg/ml、诱变菌株0.85mg/ml，放线菌素X₂的最高产量为0.15mg/ml。

发明内容

本发明的目的是提供一株链霉菌及其在生产放线菌素中的应用。

本发明提供的链霉菌(Streptomyces sp.)MS449，已于2011年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCCNo.5452。

本发明还保护所述链霉菌MS449在生产放线菌素中的应用。所述放线菌素可为放线菌素X₂、放线菌素D和放线菌素X_0β中的至少一种。

本发明还保护一种种子培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将20-30g可溶性淀粉、0.2-0.6g L-天冬酰胺、0.5-1.0g KNO₃、0.2-0.6g K₂HPO₄·H₂O、0.2-0.6gNaCl和0.2-1.0g MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。所述种子培养基的pH可为7.0-7.5。所述种子培养基具体可通过如下方法制备得到：将25g可溶性淀粉、0.4g L-天冬酰胺、0.8g KNO₃、0.4g K₂HPO₄·H₂O、0.4g NaCl和0.6g MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。

本发明还保护一种发酵培养基，是通过如下方法制备得到的培养基：将5-15g葡萄糖、10-30g稷粉、10-30g棉籽蛋白粉和10-30g 3-(N-吗啉基)丙磺酸用水定容至1L。所述发酵培养基的pH可为7.0-7.5。所述发酵培养基培养基具体可通过如下方法制备得到：将10g葡萄糖、20g稷粉、20g棉籽蛋白粉和20g 3-(N-吗啉基)丙磺酸用水定容至1L。

本发明还保护一种制备放线菌素的方法，是发酵所述链霉菌MS449，得到放线菌素。所述发酵的条件具体可为25-30℃、140-200rpm、6-20天(如6-15天)。所述发酵的条件具体可为28℃、180rpm、15天。

所述方法具体可包括如下步骤：将所述链霉菌MS449的种子液接种至所述发酵培养基中发酵并收获发酵液。

所述方法中，可将5ml所述种子液接种至100ml所述发酵培养基中。所述种子液具体可通过如下方法制备：将所述链霉菌MS449接种于所述种子培养基中，25-30℃(如28℃)、140-200rpm(如180rpm)培养2-6天(如96小时)，得到种子液。

所述方法还可包括如下步骤：

(1)将所述发酵液离心(离心参数具体可为：4℃、8000转/min、15min)，分别收集上清液和沉淀；

(2)将步骤(1)获得的沉淀用丙酮浸提(可室温静置10小时)，离心(离心参数具体可为：4℃、8000转/min、15min)并收集上清液；