[发明专利]一种敲除PD1的靶向LMP1的CAR-T细胞的制备方法和应用

摘要

一种敲除PD1的靶向LMP1的CAR‑T细胞的制备方法，包括如下步骤：S1，构建PD1基因sgRNA质粒pGL3‑U6‑hPD1‑sgRNA和LMP1‑CAR细胞质粒LMP1‑CAR PiggyBac Transposon，将pGL3‑U6‑hPD1‑sgRNA和LMP1‑CAR PiggyBac Transposon质粒与电转缓冲液混合，制得电转混合液，并用电转混合液转染PBMC细胞，得到转染后的PBMC细胞；S2，将转染后的PBMC细胞转入T细胞培养基，用磁珠激活CD3阳性T细胞，并培养扩增转染后的PBMC细胞，获得敲除PD1的LMP1‑CAR‑T细胞。本发明采用靶向LMP1的CAR‑T细胞联合敲除PD1的联合治疗，对患者的T细胞进行PD1敲除，纠正免疫逃逸，恢复患者的免疫功能，增强CAR‑T细胞攻击淋巴瘤的效应。在制备EVB淋巴瘤诊断试剂或治疗药物中的应用具有重要的临床意义。