[发明专利]一种荧光标记CRISPR/SpCas9系统介导的基因替换体系及其在植物中的应用在审

专利信息
申请号: 202110072099.6 申请日: 2021-01-19
公开(公告)号: CN112680474A 公开(公告)日: 2021-04-20
发明(设计)人: 夏兰琴;李慧园;闫磊 申请(专利权)人: 中国农业科学院作物科学研究所
主分类号: C12N15/82 分类号: C12N15/82;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/65
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 张羽
地址: 100081 北京市海淀区中关*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明公开了一种重组载体、DNA分子、应用及植物中以RNA转录本为模板进行目的基因同源重组的方法。该重组载体包括表达盒甲、表达盒乙和表达盒丙;表达盒甲包括启动子甲、SpCas9‑T2A‑GFP和终止子;表达盒乙包括启动子乙和gRNA的编码基因,gRNA靶向的目标片段是植物基因组中将被替换的DNA片段;表达盒丙包括启动子丙、核酸酶甲的编码基因、模板区段、核酸酶乙的编码基因,模板区段包括目标片段的上游同源臂、供体片段和目标片段的下游同源臂;供体片段与目标片段具有如下差异:供体片段含有预期在目标片段中引入的差异核苷酸。本发明的重载载体利用CRISPR/SpCas9系统,以RNA作为同源重组修复模板,在水稻中实现目的基因的替换,扩展TT‑HDR对于CRISPR/SpCas9系统的应用范围。
搜索关键词: 一种 荧光 标记 crispr spcas9 系统 基因 替换 体系 及其 植物 中的 应用
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