[发明专利]一种喇叭虫RNA干扰表达载体与构建方法及其应用有效
| 申请号： | 202010434356.1 | 申请日： | 2020-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN111471685B | 公开（公告）日： | 2021-12-21 |
| 发明（设计）人： | 缪炜;韦薇;柴小翠;张巨源;张承才 | 申请（专利权）人： | 中国科学院水生生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;C12N15/65;A01N57/16;A01P7/04 |
| 代理公司： | 湖北天领艾匹律师事务所 42252 | 代理人： | 程明 |
| 地址： | 430000*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种喇叭虫RNA干扰表达载体与构建方法及其应用。步骤包括：1)利用质粒pSCTGA的已知序列，获得pSCTGA质粒骨架；2)利用集胞藻PCC6803基因组DNA，通过PCR扩增C‑藻蓝蛋白β亚基的启动子；3)利用质粒L4440，通过PCR扩增质粒的多克隆位点；4)利用PCR扩增获得的DNA片段，通过同源重组的融合PCR和一步克隆法最终构建得到RNAi表达载体pSCT3C。本发明首先利用氯化钙法将含有目的基因的RNAi表达载体转染进大肠杆菌DH10B菌株，然后再采用接合转移方法将其转染进集胞藻PCC6803中，成功获得阳性单克隆藻株后，可通过喂食方式用于干扰天蓝喇叭虫中目的基因的表达。综上所述，本发明方法易行，操作方便，具有应用于其他纤毛虫基因干扰的可行性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 喇叭 rna 干扰 表达 载体 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
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